关键词:
鲤
环指蛋白14
生物信息学
鲤春季病毒血症病毒
多肌胞苷酸
病原刺激
免疫响应
摘要:
【目的】探究鲤环指蛋白14(ring finger protein 14,RNF14)基因的生物学功能,为阻断鲤春季病毒血症病毒(spring viremia of Cyprinus carpio virus, SVCV)感染提供新思路。【方法】采用PCR技术、生物信息学分析和实时荧光定量PCR方法,对鲤RNF14基因功能进行初步分析,研究其在病毒刺激后的表达规律。【结果】鲤RNF14基因编码区全长1 362 bp,编码453个氨基酸;鲤RNF14与犀角金线鲃亲缘关系较近,与原鸽亲缘关系较远;该蛋白属酸性不稳定亲水性蛋白;功能结构域预测显示该蛋白为典型的RBR E3s;泛素化底物分析结果显示,该蛋白与RBCK1、Nedd4l、Notch1a等蛋白相互作用的置信度较高。组织表达谱分析表明,鲤RNF14基因在各组织或器官中广泛表达,以心脏中相对表达量最高。与对照组相比,高剂量SVCV在体感染鲤24 h后,RNF14基因的mRNA表达水平在肌肉中显著升高;多肌胞苷酸(polyinosinic acid-polycytidylic acid,ploy(I:C))在体刺激鲤24 h后,RNF14基因的mRNA表达水平在肾脏和头肾中显著升高。与对照组相比,低剂量SVCV和poly(I:C)离体刺激下,鲤RNF14基因mRNA表达水平在各取样时间点均极显著升高。在体和离体病原刺激结果表明,鲤RNF14基因参与了病原刺激后的免疫应答过程,提示鲤RNF14基因可能是阻断SVCV感染的潜在靶点。【结论】成功克隆了鲤RNF14基因的基因编码区,揭示了鲤RNF14基因在SVCV和poly(I:C)刺激下免疫响应规律。