关键词:
痘苗病毒
生物学特性
免疫荧光
二代测序
生物信息学分析
摘要:
目的进一步研究痘苗病毒天坛株(vaccinia virus Tiantan strain,VTT)中传代获得的广-9株(VG9)的生物学特性。方法取冻干VG9株复溶后接种Vero细胞进行复苏并连续传代,通过间接免疫荧光法和PCR法对该毒株进行鉴定。使用二代测序技术对该毒株进行全基因组测序,将测序结果与天坛株参考基因组序列及其他33株正痘病毒基因组序列进行比对,并绘制系统发育树。通过终末稀释法获得1株VG9克隆纯化株(VG9-V3-3),对该克隆株的病毒滴度、兔皮内毒力等生物学特性进行初步研究。结果经间接免疫荧光鉴定,VG9株可以与VTT兔免疫血清特异性结合,PCR结果证明该病毒株含有痘苗病毒特征性TK基因片段。全基因组测序结果显示该VG9株基因组全长183596 bp,其中编码区165150 bp,将测序结果在NCBI核心核苷酸数据库内进行比对,结果显示VG9株与现有多个VTT株的序列高度同源(一致性>99.5%)。经序列比对发现VG9株与VTT TP5分离株的基因序列共存在749个核苷酸位点差异。VG9-V3-3分离株的病毒滴度为6.3 lg(PFU/ml),兔皮内毒力试验显示其毒力较VTT株明显减弱。结论对VG9株生物学特性进行了初步研究并获得1株纯化克隆株VG9-V3-3,该分离株病毒滴度基本稳定,且毒力较VTT株明显减弱,后续还将对该毒株的免疫原性进行深入研究,以探索其作为疫苗生产毒株的可行性。