关键词:
失血性休克
急性肺损伤
自噬
炎症反应
氧化应激
摘要:
目的探讨自噬在失血性休克小鼠急性肺损伤(ALI)中的生物学作用及机制。方法按随机数字表法将野生型雄性C57BL/6小鼠分为对照组、ALI组、雷帕霉素组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,每组8只;将自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)基因敲除的C57BL/6小鼠分为LC3敲除组和LC3敲除+ALI组,每组8只。对照组、ALI组、LC3敲除组、LC3敲除+ALI组腹腔注射2 mL/kg生理盐水,雷帕霉素组腹腔注射3 mg/kg自噬激活剂雷帕霉素,3-MA组腹腔注射15 mg/kg自噬抑制剂3-MA,均连续给药3 d,末次给药后2 h制备失血性休克致ALI模型。制模后24 h处死小鼠,计算肺指数;苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理改变并计算肺损伤评分;蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测肺组织自噬基因LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1的表达;按试剂盒步骤检测肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)含量。结果与对照组比较,ALI组肺组织结构破坏、渗出增多,肺指数、肺损伤评分、肺组织中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1表达及TNF-α、IL-6、MDA含量均明显升高。与ALI组比较,雷帕霉素组肺组织结构破坏减轻、渗出减少,肺指数、肺损伤评分及肺组织中TNF-α、IL-6、MDA含量降低,肺组织中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1表达升高〔肺指数:(7.56±0.39)%比(9.12±0.59)%,肺损伤评分(分):3.04±0.58比9.32±2.14,TNF-α(ng/mg):1.85±0.32比3.51±0.62,IL-6(ng/mg):1.61±0.32比2.52±0.44,MDA(nmol/mg):1.03±0.16比1.88±0.24,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ:1.21±0.12比0.39±0.05,Beclin-1/β-actin:1.10±0.12比0.58±0.06,均P<0.05〕,而3-MA组肺组织结构破坏加重、渗出进一步增多,肺指数、肺损伤评分及肺组织中TNF-α、IL-6、MDA含量升高,肺组织中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1表达降低〔肺指数:(10.44±0.62)%比(9.12±0.59)%,肺损伤评分(分):11.59±2.28比9.32±2.14,TNF-α(ng/mg):4.77±0.71比3.51±0.62,IL-6(ng/mg):3.44±0.52比2.52±0.44,MDA(nmol/mg):2.71±0.42比1.88±0.24,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ:0.25±0.04比0.39±0.05,Beclin-1/β-actin:0.21±0.03比0.58±0.06,均P<0.05〕。LC3敲除ALI小鼠肺指数、肺损伤评分及肺组织中TNF-α、IL-6、MDA含量均高于野生型ALI小鼠〔肺指数:(10.44±0.75)%比(9.12±0.59)%,肺损伤评分(分):12.41±2.86比9.32±2.14,TNF-α(ng/mg):4.85±0.72比3.51±0.62,IL-6(ng/mg):3.28±0.51比2.52±0.44,MDA(nmol/mg):2.75±0.41比1.88±0.24,均P<0.05〕。结论自噬在失血性休克小鼠ALI中起保护作用,相关的分子机制是抑制炎症反应和氧化应激反应。