关键词:
橙黄网孢盘菌凝集素(AAL)
猪霍乱沙门菌
生物学特性
摘要:
为构建表达橙黄网孢盘菌凝集素(AAL)的重组减毒猪霍乱沙门菌,将AAL基因克隆至原核表达载体pTrc-His2A,并通过电穿孔的方法将重组质粒pTrc-AAL转化至减毒猪霍乱沙门菌ΔRposΔslyAΔslrp内,获得了重组减毒沙门菌ΔRposΔslyAΔslrp(pTrc-AAL),利用Western-blot检测AAL蛋白的表达,并对重组菌株的生物学特性进行评价。结果显示,携带AAL基因的重组减毒沙门菌ΔRposΔslyAΔslrp(pTrc-AAL)构建成功并表达AAL蛋白;重组菌株ΔRposΔslyAΔslrp(pTrc-AAL)的生理、生化特性与ΔRposΔslyAΔslrp(p Trc-His2A)菌株相似;与野生株(WT)相比,重组菌株ΔRposΔslyAΔslrp(pTrc-AAL)在对数期的生长速度略慢于野生株,且对抗生素氨苄西林和阿莫西林敏感,而运动性和生化特性与野生株相比无显著变化;LD50结果显示,重组菌株ΔRposΔslyAΔslrp(pTrc-AAL)的LD50较野生株提高了8.81×10^(5)倍以上。综上所述,本研究成功构建了表达外源蛋白AAL的重组减毒沙门菌ΔRposΔslyAΔslrp(pTrc-AAL),为深入探究AAL生物学功能和开发靶向M细胞的黏膜疫苗奠定了基础。