关键词： 虎乳木孔菌   菌核   生物学特性   驯化栽培  

摘要： 以一株采自海南省保亭黎族苗族自治县的野生虎乳木孔菌(EPPI-2021-159)菌株为研究对象，通过形态和分子生物学方法鉴定菌株种属，并开展生物学特性和驯化栽培研究。形态学特征和分子系统发育学分析结果表明，该菌株为虎乳木孔菌Lignosus rhinocerus；生物学特性分析的正交结果表明，虎乳木孔菌菌丝生长的最适碳源为蔗糖、最适氮源为酵母浸粉、最适pH为5.0、最适温度为28 ℃。驯化栽培结果显示，本菌株在以45%木屑的栽培料中满袋时间为(45.65±2.32) d，其菌核平均鲜重为(149.73±8.90) g。本研究为海南野生虎乳木孔菌资源保护、种质资源收集和规模化人工驯化提供了数据支撑。

关键词： 思政教育   微生物学   教学改革   教学实践   “五位一体”  

摘要： “微生物学”课程是农业院校生命科学类专业创新人才培养不可替代的专业核心课程。为培养知农爱农、强农兴农一流拔尖创新人才，华中农业大学微生物学教学团队基于人才培养的知识、能力、价值维度，立足校本特色，从教材编选、课程设计、教学方法、考核评价、师德建设等五个维度，对“微生物学”课程进行了“五位一体”的教学改革探索。基于育人目标开展教材编选、聚焦五育融通进行课程设计、深化三全育人创新教学方法，注重多元多维完善评价体系，淬炼师德师风构建新型师生关系，这些教学改革举措充分发挥了课程育人作用，提升了人才培养质量，可为其他院校课程建设提供借鉴与参考。

关键词： 人参链格孢   H   O   胁迫   过氧化氢-过氧化物酶   环境胁迫因子  

摘要： 【背景】由人参链格孢Alternaria panax引起的人参黑斑病是人参生产中重要病害之一，在我国长白山和其他人参产区均有发生，给人参生产带来较大损失。【目的】明确过氧化氢酶-过氧化物酶编码基因ApKatG1对人参链格孢生长发育、外界环境胁迫及致病性的影响。【方法】采用同源重组的方法获得人参链格孢中ApKatG1的基因缺失突变体及回补突变体，分析基因缺失突变体在不同培养条件下生长速率、产孢量、对不同胁迫因子的响应及致病性等方面的影响，明确该基因的功能。【结果】 ApKatG1基因具有典型的2个过氧化物酶（peroxidase）结构域。基因缺失突变体ΔApkatG1生长速率、产孢量和对碳源的吸收和利用与野生型菌株基本一致，对高渗胁迫因子山梨醇sorbitol、细胞壁胁迫因子刚果红Congo red的敏感性增加，原生质体释放速率加快，并且对高浓度的H2O2敏感性显著增加；H2O2处理后，ApKatG1基因表达水平显著上升；同时ApKatG1基因的缺失影响其他过氧化氢酶（CAT）基因的表达；ApKatG1基因不影响菌株对人参的致病性。【结论】ApKatG1基因在人参链格孢细胞壁完整性、H2O2胁迫条件的响应中起到重要作用。

关键词： 水飞蓟素   生物学功能   养殖业  

摘要： 在畜牧业供给侧结构改革的新常态下,“禁抗”政策不断推进,绿色安全、天然多能、生态环保的饲料添加剂在养殖业中备受青睐。水飞蓟素来源于菊科植物水飞蓟,具有保肝、抗氧化、抗炎和免疫调节、脂糖代谢调节、保护神经系统等多种生物学功能。作为一种天然的黄酮木脂素化合物,其在养殖业中具有广阔的应用前景,有能够提高动物生长性能,促进畜禽生长,优化肠道菌群结构,改善肉质品质,显著提高抗氧化应激能力,增强动物的免疫力从而降低动物的死亡率等作用。本文综述了水飞蓟素的生物学功能,总结了水飞蓟素在家禽、家畜、反刍动物、水产养殖中的应用现状,以期为促进水飞蓟素的进一步研究及其在养殖业中的开发应用提供参考。

关键词： 弗氏柠檬酸杆菌   生物学特性   药物敏感性   全基因组测序  

摘要： 【背景】弗氏柠檬酸杆菌（Citrobacter freundii）是一种人兽共患条件致病菌，多重耐药菌株的出现给全球公共健康带来严重威胁。2024年9月，扬州大学附属医院从人手掌软组织感染脓液中分离了一株细菌。【目的】对分离的细菌进行种类鉴定、生物学特性研究和全基因组测序分析。【方法】通过革兰氏染色、16S rRNA基因测序和全基因组序列分析鉴定该菌种类。通过生长曲线、药物敏感性和致病性测定探究该菌生物学特性。利用二代Illumina PE150测序和三代PacBio测序获得该菌全基因组序列，并借助多种生物信息学工具进行序列分析。通过实时荧光定量PCR （RT-qPCR）检测铁摄取相关毒力因子在铁限制条件下的表达情况。【结果】经鉴定，该菌为弗氏柠檬酸杆菌。生长曲线测定结果显示，该菌在第1 h左右进入指数生长期，在第7 h OD595值最高。药物敏感性测定结果显示，该菌对头孢拉定、阿米卡星、庆大霉素等8种药物耐药，对羧苄西林、头孢唑林、头孢曲松等11种药物敏感。致病性测定结果显示，该菌在斑马鱼模型中表现出较高致病性。全基因组测序分析结果显示，该菌全基因组大小为4 938 581 bp，GC含量为51.77%，预测编码4 576个基因，其中耐药基因有24个，毒力因子有44个。该菌基因组中预测有27个移动遗传元件、13种RNA调控元件和27个特有基因。RT-qPCR结果显示，该菌的铁摄取相关毒力因子在铁限制条件下显著上调表达。【结论】分离自人手掌软组织感染脓液的细菌为弗氏柠檬酸杆菌，该菌表现出较强耐药性和较高致病性，其基因组中携带多个耐药基因和毒力因子，临床上需引起重视。

关键词： 重症社区获得性肺炎   肺泡灌洗液   微生物学快速现场评估   抗菌治疗   疗效  

摘要： 目的 探索微生物学快速现场评估(M-ROSE)技术在重症社区获得性肺炎(SCAP)患者中的应用价值。方法 选取2023年9月—2024年12月解放军总医院第四医学中心呼吸与危重症医学科收治的124例SCAP患者,根据是否进行肺泡灌洗液(BALF)M-ROSE检测,随机数字表法1:1分为M-ROSE组和对照组,M-ROSE组进行M-ROSE检测和常规病原学[宏基因组二代测序(mNGS)、涂片、培养等]检测,对照组只进行常规病原学检测,收集两组患者的基线资料、症状体征、C-反应蛋白(CRP)水平、治疗情况、生存结局进行比较。结果 62例患者BALF标本中45例患者(72.58%)M-ROSE真菌检测结果与mNGS一致,47例(75.81%)M-ROSE球菌检测结果与mNGS一致,30例(48.39%)M-ROSE杆菌检测结果与mNGS一致。M-ROSE检测时间1.50(1.50,2.00)h,较涂片、培养、mNGS检测时间缩短(P<0.05)。抗感染治疗后M-ROSE组患者的体温恢复正常天数和痰的性质及量的改善天数均早于对照组(P<0.05),治疗后第3～5天CRP(53.44±20.59) mg/L低于对照组(P<0.05),住院第3、5、7天的治疗有效率均优于对照组(P<0.05)。结论 SCAP肺炎进行BALF的M-ROSE检测有助于早期进行快速病原学诊断,对抗感染治疗策略有一定指导作用,可加快症状和炎症因子的改善,具有一定的临床应用价值。

关键词： 牛结节性皮肤病病毒   ORF143基因   重组病毒   生物学特性  

摘要： 牛结节性皮肤病病毒（Lumpy skin disease virus, LSDV）引起的牛结节性皮肤病（Lumpy skin disease, LSD）是一种牛全身性感染疫病，对养牛产业的健康发展造成了严重威胁。本研究旨在通过构建缺失ORF143基因重组LSDV毒株，并进行其生物学特性分析，为LSDV致弱毒株的筛选及弱毒疫苗研发提供候选毒株。首先，利用同源重组技术，构建p UC19T-LSDV-ΔORF143-EGFP转移载体，再将此转移载体转染至Vero细胞并感染LSDV，利用有限稀释与单细胞亚克隆方法筛选出纯合的以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）为标识物的ORF143基因缺失重组LSDV(r LSDV-ΔORF143-EGFP)。对该重组病毒的生长曲线、滴度和遗传稳定性等进行分析。PCR扩增与重组病毒测序结果表明该r LSDV-ΔORF143-EGFP毒株已纯化成功，且至少20代内可稳定遗传；生长曲线结果表明该重组毒株增殖能力低于野生型LSDV毒株（LSDV-WT）。本研究成功构建并纯化出重组病毒r LSDV-ΔORF143-EGFP，为LSDV弱毒疫苗研究提供候选毒株，为LSD新型疫苗研究提供理论基础。

摘要： 荚膜是以多糖聚合物为主要成分，存在于某些细菌表面的一种特殊结构，包裹在细菌外表面的一层松散的粘液物质，是细菌表面的主要特征[1]。因其主要组分是多糖，在致病菌中又称荚膜多糖。由于直接覆盖在细菌外部，荚膜对细菌起着一定的保护作用，同时在细菌的黏附性以及病原菌致病性等方面有重要影响[2]。

关键词： 驴源马链球菌兽疫亚种   基因组比较分析   多位点序列分型   致病性   耐药性  

摘要： 【目的】开展新疆两株驴源马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp. zooepidemicus， SEZ)不同区域流行株(YLCD588和HT222)的致病特征、耐药特点、多位点序列分型(multiple locus sequence type， MLST)及其基因组比较分析，明确该菌的分子进化规律，分析该菌致病性和耐药性相关的基因和表型特征，探究SEZ的致病与耐药机制，为该菌的防控提供科学依据。【方法】利用二代测序技术对分离菌株进行全基因组测序，测序数据与数据库中已有序列构建MLST发育树；利用毒力因子数据库(https://***/VFs/)和基因组流行病学中心数据库(http://***)对其毒力基因和耐药基因分别进行注释和比较；对2株菌的生长、药物敏感性和生物膜形成进行检测与比较。将菌株分别接种小鼠，观察比较实验动物的发病 情况，并对发病小鼠的肺脏和脾脏组织进行病理组织学观察和组织菌体载量的检测比较。【结果】测序结果显示，HT222与YLCD588基因组大小分别为2 105 005 bp和2 090 225 bp，分别有1 995和1 905个编码区，HT222共有214个毒力基因，YLCD588共有212个毒力基因；HT222携带有235个耐药基因，YLCD588共有233个耐药基因。YLCD588为一个新的ST型ST545，MLST系统进化树显示YLCD588与山羊源SEZ具有最近的亲缘关系，而HT222则与犬源SEZ亲源关系最近。YLCD588对6种抗生素耐药，HT222对4种抗生素耐药。结晶紫法(P<0.05)和共聚焦显微观察均表明YLCD588生物膜形成能力显著高于HT222，而HT222菌株对小鼠致死率(P<0.05)及组织荷菌量(P<0.01)显著高于YLCD588，且对小鼠病理损伤更严重。【结论】2株流行株具有不同的基因组特征、序列分型(sequence type， ST)、致病和耐药特征，HT222比YLCD588携带毒力和耐药基因多，致病表型更强；YLCD588比HT222生物膜形成能力强，耐药表型显著；拓宽了对不同驴源SEZ分子流行、致病与耐药机制的认识，为有效控制SEZ的感染传播以及临床治疗提供参考。

关键词： 肺炎克雷伯菌   噬菌体   生物学特性   基因组特性分析   透射电镜   一步生长曲线  

摘要： 目的 从医院未经处理的污水中分离一株靶向K39型肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体，并系统分析其生物学特性及基因组学信息。方法 以基于荚膜多糖基因序列鉴定的K39型肺炎克雷伯菌Kp1000为宿主菌，采用双层琼脂平板法进行噬菌体的分离与纯化。通过负染法结合透射电子显微镜观察噬菌体的形态特征，利用噬斑法评估其裂菌谱。进一步测定噬菌体的最佳感染复数（MOI），完成一步生长曲线、温度及酸碱等耐受性实验，评估其生物学特性。最后，提取噬菌体DNA，利用Illumina HiSeq2000测序平台进行全基因组测序，并对测序结果进行注释与分析。结果 成功分离到一株特异性靶向K39型肺炎克雷伯菌的裂解性噬菌体，命名为IME330。透射电镜显示，该噬菌体头部直径为（75±1）nm，尾长为（185±1）nm。裂菌谱分析表明，IME330能裂解K39型肺炎克雷伯菌，显示出较窄的宿主范围和高度特异性。其最佳感染复数（MOI）为0.1，裂解量达168 PFU/cell。理化特性实验表明，IME330对高温及酸碱环境（pH 4～10）具有较强的耐受性。基因组分析显示，IME330基因组全长144 245 bp，分子量为46 463 MDa，G+C含量为44.8%，共编码320个开放阅读框。结论 IME330被鉴定为一株新型裂解性肺炎克雷伯菌噬菌体，隶属于有尾噬菌体目。该噬菌体对温度、酸碱等理化因素具有较强耐受性，且表现出高效的裂解能力，但其裂菌谱较窄，宿主特异性较高。