三元复合因子Net基因的克隆及其真核表达

作     者：李百文 倪培华 诸琦 徐洪 LI Baiwen;NI Peihua;ZHU Qi;XU Hong

作者机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院消化内科上海200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院检验系上海200025 上海交通大学医学院基础医学院生物化学教研室上海200025 

出 版 物：《检验医学》 (Laboratory Medicine)

年 卷 期：2009年第24卷第6期

页      面：423-427页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：上海市教委基金项目(05B240) 

主　　题：Net 克隆 融合蛋白 

摘      要：目的克隆人Net基因,构建Net基因表达载体并诱导融合蛋白表达。方法从正常人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中抽提总RNA,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出人全长Net cDNA,构建pEGFP-N1/Net重组体质粒,并将其转染入高表达原癌基因c-fos的人胰腺癌细胞PANC-1中,分析转染细胞的Net表达水平和对细胞增殖力的影响。结果从人胰腺癌细胞PANC-1中克隆出长约1 224 bp的Net基因目的片段,成功构建了重组质粒pEGFP-N1/Net,诱导表达目的蛋白后,Net抑制原癌基因c-fos的表达,进而抑制人胰腺癌细胞的增殖。结论构建重组质粒pEGFP-N1/Net并表达Net融合蛋白,其抑制了细胞的增殖,为进一步研究Net的各种生物学活性及作用机制奠定了基础。