Notch1信号通路对小鼠触液神经元体外增殖能力的调节作用

作     者：何宇祺 林宗龙 王硕 陈立 王洪超 施晓会 豆晓伟 李青 HE Yuqi;LIN Zonglong;WANG Shuo

作者机构：贵州医科大学临床医学院贵阳市550025 湖北省恩施土家族苗族自治州中心医院骨科恩施市445000 山东省日照市莒县人民医院骨科276500 四川省达州市中心医院骨科635001 贵州医科大学附属医院临床研究中心贵阳市550004 贵州医科大学附属医院创伤骨科贵阳市550004 

出 版 物：《中国脊柱脊髓杂志》 (Chinese Journal of Spine and Spinal Cord)

年 卷 期：2021年第31卷第3期

页      面：262-270页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 09[农学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金(81960234) 贵州省自然科学基金[QKH-J(2020)1Y323] 

主　　题：触液神经元 神经干细胞 Notch1信号通路 增殖 大鼠 

摘      要：目的:探讨Notch1信号通路在调节小鼠触液神经元增殖中的作用。方法:(1)取出生24h内C57BL/6小鼠延髓组织,消化后提取细胞,经流式细胞分选得到触液神经元(cerebrospinal fluid-contacting neurons, CSFcNs)。将CSF-cNs悬浮培养并传代。(2)将CSF-cNs传至第2代,培养0h、24h、48h、72h、96h、120h时应用CCK-8法检测CSF-cNs光密度(optical density,OD)值,培养5d时应用免疫荧光检测CSF-cNs特异性标志物多囊肾病2型1通道蛋白(polycystic kidney disease 2 like 1,PKD2L1)与神经干细胞标志物Nestin、Sox2及增殖标志物Ki67共表达情况。(3)将第3代CSF-cNs分为4组:对照组、Jagged-1组、二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组、γ-分泌酶抑制剂(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯[(3,5-difluorophenylacetyl)-L-alanyl-L-2-phenylglycine tert-butyl ester,DAPT]组。对照组采用无血清神经培养液培养;Jagged-1组采用无血清神经培养液+5μmol/L Jagged-1培养;DMSO组采用无血清神经培养液+0.05%DMSO培养;DAPT组采用无血清神经培养液+50μmol/L DAPT培养。培养0h、24h、48h、72h、96h、120h时应用CCK-8法检测各组CSF-cNs的OD值;培养5d时应用Western Blot检测各组CSF-cNs PKD2L1、Notch1、Notch受体胞内段(NICD)、Hes1、β-actin蛋白表达情况,应用免疫荧光法检测各组CSF-cNs增殖标志物Ki67蛋白荧光强度(arbitrary unit,A.U.)值。结果:(1)提取的细胞经流式细胞分选后得到的CSF-cNs纯度为(94.5±2.03)%,存活率为(93.64±2.35)%。CSF-cNs可连续传代并形成神经球。(2)第2代CSF-cNs培养0h、24h、48h、72h及96h时的OD值具有统计学差异(P0.05)。结论:CSF-cNs在体外具有神经干细胞潜能;激活Notch1信号通路可增强CSF-cNs的增殖能力,抑制Notch1信号通路可降低CSF-cNs的增殖能力。