DuCV和GPV与DEV三重PCR检测方法的建立及应用

作     者：田琴 张明华 周碧君 程振涛 王开功 文明 TIAN Qin;ZHANG Minghua;ZHOU Bijun;CHENG Zhentao;WANG Kaigong;WEN Ming

作者机构：贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 贵州省动物疫病研究室贵州贵阳550025 贵州省动物生物制品工程技术研究中心贵州贵阳550025 

出 版 物：《湖南农业大学学报（自然科学版）》 (Journal of Hunan Agricultural University(Natural Sciences))

年 卷 期：2021年第47卷第2期

页      面：225-230页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31560703) 贵州省百层次创新型人才项目(黔科合人才4009号) 贵州省科技平台及人才团队计划项目(黔科合平台人才5253号) 贵州省生态家禽产业技术体系功能实验室项目(黔农体系03号) 三穗鸭工程技术研究中心建设项目(黔科合平台人才5203号) 贵州省研究生教育创新计划项目(GZZ2017002) 

主　　题：鸭圆环病毒(DuCV) 鹅细小病毒(GPV) 鸭肠炎病毒(DEV) 三重PCR 退火温度 引物终浓度 

摘      要：根据GenBank中的序列,合成针对鸭圆环病毒(DuCV)REP基因、鹅细小病毒(GPV)NS1基因、鸭肠炎病毒(DEV)UL6基因的3对特异性引物,以病毒的克隆质粒作为模板,进行退火温度、引物终浓度的优化,建立一种能同时鉴别DuCV、GPV、DEV的三重PCR检测方法,并检验该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示:试验所建立的三重PCR检测方法的最适退火温度为58.5℃,引物DuCV REP、GPV NS1、DEV UL6的最适终浓度分别为0.9、0.6、0.7μmol/L;该方法能够同时扩增出DuCV、GPV和DEV的特异性片段,而不能扩增出NDV、RA、AIV、DHV和TUMV,表明该方法特异性强;该方法对质粒DuCV、GPV和DEV模板的最低检测量分别为1、100、10 fg,表明该方法敏感性好;运用该方法对DuCV+GPV+DEV、DuCV+GPV、GPV+DEV、DuCV+DEV、DuCV、GPV、DEV进行检测,均能扩增出与预期一致的特异性片段,表明该方法重复性好;运用该方法对42份临床样本进行检测,其检出率分别为26.19%、30.95%和19.05%,与单一PCR的检出结果一致,表明该方法能适用于临床样本的检测。试验建立的方法具有快速、简便、特异性强、敏感性好、重复性好等特点,可用于DuCV、GPV和DEV临床样本混合感染的快速诊断及鉴别诊断。