小鼠miR-125b慢病毒过表达载体构建与鉴定

作     者：顾玉青 孙杰 李占军 高文涛 钱祝银 

作者机构：南京医科大学第一附属医院胆胰外科江苏省210029 

出 版 物：《江苏医药》 (Jiangsu Medical Journal)

年 卷 期：2013年第39卷第14期

页      面：1616-1618,F0002页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：江苏省高校优势学科建设工程(PAPD) 

主　　题：miR-125b 慢病毒过表达载体 胰腺β细胞 

摘      要：目的构建小鼠胰腺β细胞NIT-1中miR-125b慢病毒过表达载体。方法从小鼠基因组DNA中用PCR扩增miR-125b的前体序列,经NheⅠ和PstⅠ酶切后连接到Lv-CMV-GFP载体中,并对重组质粒进行双酶切鉴定和测序分析。将miR-125b过表达载体、pVSV-G和delta8.91质粒共转染293T细胞,收获慢病毒感染NIT-1细胞,流式细胞术分选阳性细胞,RT-PCR鉴定稳转细胞株中miR-125b的表达。结果成功构建了miR-125b慢病毒表达载体,感染小鼠胰腺β细胞NIT-1后能够成功过表达miR-125b。结论成功构建miR-125b慢病毒过表达载体,为进一步研究其功能建立了实验基础。