灰葡萄孢菌过氧化物酶体及细胞核的荧光蛋白标记

作     者：虞梦雪 王教瑜 王士臻 李玲 王艳丽 孙国昌 Mengxue Yu;Jiaoyu Wang;Shizhen Wang;Ling Li;Yanli Wang;Guochang Sun

作者机构：浙江农林大学农业与食品科学学院浙江临安311300 浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所农产品质量安全危害因子与风险防控国家重点实验室浙江杭州310021 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2021年第61卷第5期

页      面：1246-1256页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 

基　　金：浙江省自然科学基金(LZ20C140001) 浙江省重点研发计划(2019C02010) 国家自然科学基金(31470249) 

主　　题：灰葡萄孢菌 荧光蛋白标记 细胞核 过氧化物酶体 

摘      要：【目的】对灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)的细胞核和过氧化物酶体进行荧光蛋白标记,为研究其生长发育和侵染过程中细胞结构和细胞器动态提供基础。【方法】以绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(DsRED、mCherry)为报告基因,利用根癌农杆菌介导转化(Agrobacterium tumefaciens mediated transformation,AtMT)将3种荧光蛋白标记载体分别导入灰葡萄孢菌标准菌株B05.10;通过PCR检测及荧光观察筛选和验证转化子,并进行单孢纯化;利用共聚焦显微镜记录细胞器荧光定位情况。【结果】获得了过氧化物酶体或细胞核稳定表达红、绿色荧光的重组单孢菌株,PCR验证表明标记基因成功整合入转化子基因组。在标记细胞核的菌株中,菌丝和孢子中可见多个明亮、圆形的荧光点,与DAPI染色共定位。标记过氧化物酶体的菌株中,菌丝和孢子中可见小点状绿色或红色荧光,在脂类物质诱导下荧光点数量明显增加,符合过氧化物酶体分布及动态特征。细胞壁染色结果显示,细胞壁染色产生的蓝色荧光与红、绿荧光蛋白的荧光互不干扰,标记效果良好。【结论】获得了理想的过氧化物酶体或细胞核荧光标记的灰葡萄孢菌菌株,为研究其细胞器动态以及生长发育与致病分子机制提供了参考和材料。