青鳉脑型芳香化酶 cyp19b 基因的敲除和鉴定

作     者：常宇阳 武小雯 郭海燕 关桂君 CHANG Yuyang;WU Xiaowen;GUO Haiyan;GUAN Guijun

作者机构：上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室上海201306 上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室上海201306 上海海洋大学水产科学国家实验教学示范中心上海201306 

出 版 物：《生物学杂志》 (Journal of Biology)

年 卷 期：2021年第38卷第3期

页      面：63-67页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家重点研发计划项目(2018YFD0900601) 国家自然科学基金项目(81771545) 

主　　题：青鳉 cyp19b基因 基因敲除 CRISPR/Cas9 

摘      要：芳香化酶是调节雄激素向雌激素合成转换的关键酶。脑型芳香化酶(cyp19b)的表达在成鱼青鳉的脑中呈现显著雌雄性差异,在性腺中微弱表达且无明显性别差异。为探讨cyp19b基因的生理功能,采用CRISPR/Cas9系统靶向敲除cyp19b基因。在青鳉cyp19b基因的第2和第4外显子上分别设计一个靶位点,通过显微注射gRNA和Cas9蛋白到一细胞期的受精卵进行cyp19b双靶点基因敲除。研究结果表明:成功获得两种可遗传的cyp19b突变等位基因型种鱼,并通过杂合子交配、基因组PCR及DNA测序分析,选育得到两种cyp19b敲除突变型纯合子品系。表型观察分析显示,两种突变型纯合子品系均无明显雌雄性偏差,胚胎均可以正常发育,成鱼均可以正常生殖,提示cyp19b基因的缺失可能不直接影响性腺的雌雄性分化。cyp19b基因如何影响性腺分化和发育,有待进一步深入探讨。