两种层析方法纯化轮状病毒效果的比较

作     者：杨星 吴晋元 易山 李鸿钧 张光明 郜岩 贾琴妹 赵晓南 孙茂盛 YANG Xing;WU Jin-yuan;YI Shan;LI Hong-jun;ZHANG Guang-ming;GAO Yan;JIA Qin-mei;ZHAO Xiao-nan;SUN Mao-sheng

作者机构：中国医学科学院 北京协和医学院 医学生物学研究所 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医学院昆明650031 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2012年第25卷第6期

页      面：754-758页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：云南省社会发展科技计划国际合作项目(2008CA028) 云南省应用基础研究计划面上项目(2009CD142) 

主　　题：轮状病毒 纯化 离子交换层析 凝胶过滤层析 

摘      要：目的比较两种不同的凝胶层析纯化方法对人轮状病毒(Rotavirus,RV)的纯化效果及其对病毒抗原性和免疫原性的影响。方法病毒收获液经超滤浓缩后,分别采用Q Sepharose Fast Flow(QFF)离子交换层析和Sepharose 4 Fast Flow(4FF)凝胶过滤层析纯化,采用A群轮状病毒诊断试剂盒(胶体金)检测纯化病毒的抗原性;电镜观察病毒的形态;荧光灶法测定病毒纯化前后的感染性滴度;双抗体夹心ELISA法测定抗原含量;Lowry法测定纯化前后样品的蛋白含量;SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化的病毒蛋白;纯化病毒经灭活后,PAGE分析病毒的核酸带型,免疫小鼠,检测纯化病毒的免疫原性。结果QFF洗脱峰1和4FF洗脱峰1为RV抗原阳性,电镜观察可见完整的、大小约70 nm的RV颗粒;经QFF和4FF层析纯化后,病毒的感染性滴度分别为7.10和4.50 lgCCID50/ml,最终抗原回收率分别为65.3%和11.8%,病毒液总蛋白去除率分别为99.68%和99.52%;SDS-PAGE分析显示,经QFF和4FF纯化的样品未见明显杂蛋白条带,且特异性良好;纯化病毒灭活后,病毒基因组带型未发生改变,且保持了良好的抗原性和免疫原性。结论两种凝胶层析方法均能纯化人轮状病毒,综合比较,QFF离子交换层析纯化效果优于4FF凝胶过滤层析。