农杆菌介导香菇URA3基因RNAi体系构建

作     者：朱秋瑾 李晓慧 刘建雨 姜宁 章炉军 于海龙 尚晓冬 谭琦 ZHU Qiujin;LI Xiaohui;LIU Jianyu;JIANG Ning;ZHANG Lujun;YU Hailong;SHANG Xiaodong;TAN Qi

作者机构：上海海洋大学食品学院上海201200 上海市农业科学院食用菌研究所农业农村部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403 江苏省中国科学院植物研究所江苏南京210014 

出 版 物：《食用菌学报》 (Acta Edulis Fungi)

年 卷 期：2021年第28卷第3期

页      面：1-10页

学科分类：09[农学] 0902[农学-园艺学] 090202[农学-蔬菜学] 

基　　金：上海市科技兴农项目(2019-02-08-00-08-F01114) 现代农业产业技术体系建设专项(CARS-20) 国家重点研发计划(2019YFD1001900) 上海市现代农业产业技术体系建设[沪农科产字(2020)第9号] 

主　　题：香菇 URA 3基因 RNAi 转化 实时荧光定量PCR 

摘      要：选择香菇(Lentinula edodes)内源乳清酸核苷-5′-单磷酸脱羧酶基因(URA 3)为沉默靶基因,以其功能结构保守区域451~884 bp处的反向互补序列为干扰片段,将pCAMBIA1390改造为发卡结构载体HpV、GPiE改造为双启动子载体DpV-2。采用农杆菌介导转化法侵染小米粒培养基培养的香菇菌丝,通过初筛、复筛、测序获得11个HpV转化子和38个DpV-2转化子,将其接种在PDA平板(含有0.2 g·L^(-1)5-FOA、100 mg·L^(-1)尿嘧啶核苷)上培养,均可以生长,而野生型菌株菌丝发生褐变且生长受到抑制。采用实时荧光定量PCR方法研究11个HpV转化子和13个DpV-2转化子URA 3基因表达情况,结果表明:与野生型菌株比较,5个HpV转化子、3个DpV-2转化子URA 3基因表达量显著下调,1个HpV转化子、2个DpV-2转化子URA 3基因表达量极显著下调。成功构建的香菇URA 3基因RNAi体系可以为香菇基因功能研究以及定向育种工作开展提供有效方法。