表达绿色荧光和红色荧光蛋白重组新城疫病毒的构建

作     者：王杨杨 薛玲 王文莉 陈卿 胡顺林 刘秀梵 WANG Yangyang;XUE Ling;WANG Wenli

作者机构：扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 

出 版 物：《中国家禽》 (China Poultry)

年 卷 期：2021年第43卷第6期

页      面：104-107页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-40) 国家重点研发计划(2017YFD0500702) 

主　　题：重组新城疫病毒 绿色荧光蛋白 红色荧光蛋白 串联 

摘      要：试验旨在探究以新城疫病毒为载体进行多联疫苗的构建。通过将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因和红色荧光蛋白(DsRed)基因用T2A肽串联后克隆入嵌合新城疫病毒AI4-2FHN的P和M基因之间,获得重组质粒pAI4-2FHN-GRFP。该质粒与pCI-NP、pCI-P和pCI-L 3个辅助质粒共转染至稳定表达T7 RNA聚合酶的BSR细胞后,获得可同时表达绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白的重组新城疫病毒。拯救病毒在SPF鸡胚中繁殖传代,通过RT-PCR验证,并检测重组病毒的生物学活性和外源蛋白的表达效率。结果显示:重组病毒在鸡胚内传3代后,鸡胚尿囊液HA效价稳定在8 log2,感染细胞24 h、36 h、48 h后在荧光显微镜下观察到EGFP与DsRed的荧光亮度逐渐增强,且相同时间内红色荧光蛋白与绿色荧光蛋白表达量相似。重组病毒的构建为新城疫病毒作载体用于多联多价疫苗的研发提供了参考。