龙鳖胶囊含药血清对YAP抑制剂诱导人软骨细胞凋亡的保护作用及机制研究

作     者：梁桂洪 黄和涛 潘建科 曾令烽 杨伟毅 罗明辉 杨园 陈红云 韩燕鸿 赵金龙 刘军 LIANG Guihong;HUANG Hetao;PAN Jianke;ZENG Lingfeng;YANG Weiyi;LUO Minghui;YANG Yuan;CHEN Hongyun;HAN Yanhong;ZHAO Jinlong;LIU Jun

作者机构：广州中医药大学第二附属医院(广东省中医院)骨科广州510120 广东省中医药科学院骨与关节退变及损伤研究团队广州510120 

出 版 物：《中国药房》 (China Pharmacy)

年 卷 期：2021年第32卷第12期

页      面：1442-1448页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.82004386,No.81873314,No.81974574,No.82004383) 广东省中医药局科研项目(No.20201129) 广东省医学科学技术研究基金项目(No.A2020105) 广东省财政厅项目(No.粤财社157号) 广州市科技计划项目(No.202102010273) 广东省中医院中医药科学技术研究专项课题(No.YN2019ML08) 

主　　题：龙鳖胶囊 含药血清 骨性关节炎 软骨细胞 Yes结构结合蛋白抑制剂 凋亡 自噬 

摘      要：目的:探索龙鳖胶囊含药血清(后文简写为LBJN)对Yes结构结合蛋白(YAP)抑制剂维替泊芬(verteporfin)诱导软骨细胞凋亡的保护作用及机制。方法:通过两步酶消化法提取原代人膝骨性关节炎软骨细胞,利用甲苯胺蓝染色法和Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光染色法对细胞进行鉴定。采用流式细胞术检测2、5μmol/L verteporfin单用和分别与5%LBJN联用48 h后对细胞凋亡的影响,并设置溶剂对照[0.1%二甲基亚砜(DMSO)]和5%LBJN对照。采用Western blot法检测0.1%DMSO(溶剂对照)、2μmol/L verteporfin、2μmol/L verteporfin+5%LBJN和0(空白对照)、2.5%LBJN、5%LBJN处理48 h后细胞中凋亡相关蛋白[YAP、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、活化胱天蛋白酶3(cleaved-caspase-3)]的表达水平;采用Western blot法检测0(空白对照)、2.5%、5%LBJN处理48h后细胞中自噬相关蛋白[哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、Beclin-1、LC3A/B]的表达水平。结果:分离出的细胞符合软骨细胞的特征。与0.1%DMSO比较,2、5μmol/L verteporfin作用后细胞的凋亡率均显著升高(P0.05);与单用verteporfin比较,2、5μmol/L verteporfin与5%LBJN联用后细胞的凋亡率均显著降低(P0.05)。与0.1%DMSO比较,2μmol/L verteporfin作用后细胞中YAP、Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(P0.05),而cleaved-caspase-3蛋白表达水平显著升高(P0.05);与2μmol/L verteporfin比较,2μmol/L verteporfin+5%LBJN作用后细胞中YAP、Bcl-2蛋白的表达水平均显著升高(P0.05),而cleaved-caspase-3蛋白的表达水平显著降低(P0.05)。与空白对照比较,2.5%、5%LBJN作用后细胞中YAP、Bcl-2、Beclin-1蛋白的表达水平和LC3A/B-Ⅱ/LC3A/B-Ⅰ比值均显著升高(P0.05),而cleaved-caspase-3、mTOR蛋白的表达水平均显著降低(P0.05)。结论:LBJN具有阻断YAP抑制剂verteporfin诱导的软骨细胞凋亡的作用,其机制可能与调节软骨细胞中凋亡相关蛋白的表达和增强软骨细胞的自噬有关。