bcl-2 siRNA的设计、合成及其对HL-60 bcl-2基因表达的干扰作用

作     者：燕春艳 涂玉林 钟苗 陈欣 雷小勇 YAN Chun-yan;TU Yu-lin;ZHONG Miao;Chen Xin;LEI Xiao-yong

作者机构：南华大学心血管病研究所衡阳济宁医学院病理教研室421001 南华大学生命科学与技术学院药物药理研究所 

出 版 物：《白血病．淋巴瘤》 (Journal of Leukemia & Lymphoma)

年 卷 期：2006年第15卷第5期

页      面：323-326页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助青年项目(30300426) 

主　　题：bcl-2 siRNA HL-60 bcl-2 基因表达 

摘      要：目的应用RNA干扰技术研究bcl-2siRNA对白血病细胞HL-60bcl-2基因表达的干扰作用。方法扫描bcl-2mRNA的全序列,记录从AUG启动子的AA及下游19个核苷酸肽作为潜在作用靶点。GC含量控制在30%￣65%之间。由BLAST分析排除与其他基因有高度同源性的序列。由体外转录合成法合成双链bcl-2siRNA,将bcl-2siRNA转染入HL-60细胞。收集转染48h后的细胞,流式细胞术检测蛋白表达情况,筛选出最佳作用序列进一步作各项指标检测。从mRNA水平、蛋白质水平等观察bcl-2siRNA对细胞HL-60bcl-2基因表达的干扰作用。结果收集转染48h后的细胞,经细胞免疫荧光、RT-PCR、MTT及Hoechst33258荧光染色等指标检测,可见转染bcl-2siRNA阳性组的细胞bcl-2基因表达降低及HL-60细胞凋亡等现象。而转染GAPDHsiRNA组的细胞对bcl-2表达无影响。结论采用生物信息学的方法设计出有效siRNA靶位点;bcl-2siRNA可通过降低bcl-2mRNA水平特异性抑制bcl-2蛋白质的表达。