肝细胞有效生成血小板能力的因素分析研究

作     者：喻梦茹 杨冠恒 刘光辉 曾溢滔 薛燕 马晴雯 曾凡一 Mengru Yu;Guanheng Yang;Guanghui Liu;Yitao Zeng;Yan Xue;Qingwen Ma;Fanyi Zeng

作者机构：上海交通大学医学遗传研究所上海市儿童医院上海交通大学医学院附属儿童医院上海200040 上海交通大学基础医学院组织胚胎学与遗传发育学系上海200025 国家卫健委医学胚胎分子生物学重点实验室上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海200040 

出 版 物：《中华内科杂志》 (Chinese Journal of Internal Medicine)

年 卷 期：2022年第61卷第6期

页      面：664-672页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 100215[医学-康复医学与理疗学] 10[医学] 

基　　金：国家重点研发计划(2019YFA0801402, 2016YFC1000503) 国家重大科学研究计划(2014CB964700) 国家自然科学基金(31871484) 上海市临床重点专科(shslczdzk05705) 上海市重中之重重点学科项目(2017ZZ02019) 上海市自然科学基金(16ZR1428600) 上海高水平地方高校创新团队(SHSMO-ZDCX20212200) 

主　　题：肝 血小板 巨核细胞 造血干细胞移植 

摘      要：目的探究不同来源的供体造血干细胞(hematopoietic stem cells, HSCs)体内移植后生成血小板(PLT)的差异因素, 进而为解决临床上HSCs移植后PLT重建不良的问题提供新思路。方法通过Ficoll分离技术分别从孕14.5 d(E14.5)胎肝(FL)和8周龄小鼠骨髓(BM)中分离HSCs及其下游髓系和淋巴系细胞, 即单个核细胞(MNCs)总和, 移植入清髓辐照后的受体小鼠胫骨骨髓腔内, 构建造血重建FL-MNCs和BM-MNCs小鼠移植治疗模型。定期检测受体小鼠外周血血常规指标。通过流式细胞方法检测供体细胞在受体内的嵌合率及PLT形成上游细胞。进一步利用磁珠分选FL-MNCs和BM-MNCs供体细胞中CD41+巨核细胞, 并诱导PLT生成。另外, 通过定量RT-PCR检测两种来源的CD41+巨核细胞的PLT生成相关基因的表达情况。结果 FL-MNCs移植组和BM-MNCs移植组的血常规参数包括白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、PLT均在移植后第4周恢复正常水平, 受体的血细胞基本由供体细胞替代。FL-MNCs移植组比BM-MNCs移植组受体小鼠的PLT水平上升更快, 移植后第4周FL-MNCs组和BM-MNCs组的PLT水平分别为(1.45±0.37)×1012/L和(1.22±0.24)×1012/L, P0.05。同时, FL-MNCs中含有更高比例的Lin-Sca-1+c-Kit+造血干细胞(FL-MNCs为7.60%±1.40%, BM-MNCs为1.10%±0.46%, P0.01)、Lin-Sca-1-c-Kit+CD41+CD150+巨核祖细胞(FL-MNCs为3.05%±0.22%, BM-MNCs为0.15%±0.02%, P0.01), 以及CD41+CD42b+成熟巨核细胞(FL-MNCs为1.60%±0.06%, BM-MNCs为0.87%±0.11%, P0.01)。体外功能性研究发现胎肝来源的FL-MNCs-CD41+巨核细胞在体外诱导后可更快地生成前血小板样细胞, 第3天即有前血小板样细胞形成, 第5天有明显PLT形成, 而骨髓来源的BM-MNCs-CD41+巨核细胞第5天仍没有前血小板样细胞形成。FL-MNCs-CD41+能表达更高水平的PLT生成相关基因Mpl(3.25倍)、Fog1(3倍)和Gata1(1.5倍)(P0.05)。结论 FL-MNCs具有更好的受体血小板植入效果以及更快的体外PLT分化速率, 这可能与FL-MNCs细胞组成中较高比例的巨核细胞数量及其Mpl、Fog1和Gata1等相关基因的表达水平有关。这些供体细胞特征的因素分析研究有望为临床治疗造血干细胞移植后PLT重建不良提供供体细胞参考依据。