猪繁殖与呼吸综合征病毒一步法多重RT-PCR检测方法的建立和应用

作     者：王方洲 张婧 马雪青 李平花 包慧芳 王健 赵志荀 李娇阳 李国秀 刘在新 卢曾军 曾巧英 孙普 WANG Fang-zhou;ZHANG Jing;MA Xue-qing;LI Ping-hua;BAO Hui-fang;WANG Jian;ZHAO Zhi-xun;LI Jiao-yang;LI Guo-xiu;LIU Zai-xin;LU Zeng-jun;ZENG Qiao-ying;SUN Pu

作者机构：甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2022年第52卷第7期

页      面：805-814页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：甘肃省现代农业产业体系—猪病防治与健康养猪项目(GARS-ZJ) 中国农业科学院兰州兽医研究所创新工程揭榜挂帅项目(CAAS-ASTIP-JBGS-20210601) 生猪健康养殖疫病防控及生物安全技术集成试验示范项目(GSKL-2020-7-2) 

主　　题：猪繁殖与呼吸综合征病毒 一步法多重RT-PCR 建立 应用 

摘      要：为提高实验室诊断猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的准确性,本研究分析了近几年国内流行的PRRSV毒株序列,针对主要流行的美洲型和欧洲型毒株设计合成特异性引物,建立PRRSV一步法多重RT-PCR检测方法,通过特异性、敏感性和重复性试验,与实时荧光RT-PCR对比检测田间样品,评价该方法的检测能力。结果显示,本研究筛选出了3对特异性引物,成功建立了PRRSV一步法多重RT-PCR检测方法,扩增目的片段大小分别为408 bp、548 bp、689 bp,至少扩增出任意一条特异性条带即可判为阳性;对口蹄疫病毒、猪瘟病毒、塞内卡病毒、非洲猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒均无特异性条带扩增;检测美洲型经典毒株VR-2332、高致病性毒株GSWW15株和NADC30样毒株GSWW18的最低病毒量范围为25~50 TCID_(50)/mL;45份田间临床样品的比对检测结果显示,本研究建立的多重RT-PCR检测方法检出阳性率为33.3%,与实时荧光RT-PCR方法的检测结果符合率为95.6%。结果表明,本研究建立的PRRSV一步法多重RT-PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于PRRSV流行病学的调查,具有良好的应用前景。