猪肺炎支原体DnaK基因的表达及ELISA方法建立

作     者：刘茂军 丁志勇 刘冬霞 杜海霞 缪芬芳 甘源 孔猛 冯志新 熊祺琰 白方方 杜改梅 邵国青 

作者机构：江苏省农业科学院兽医研究所.农业部兽用生物制品工程技术重点实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 金陵科技学院动物科学与技术学院江苏南京210038 

出 版 物：《金陵科技学院学报》 (Journal of Jinling Institute of Technology)

年 卷 期：2011年第27卷第4期

页      面：79-84页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：江苏省农业科技自主创新资金(cx(10)215) 国家农业科技成果转化资金项目(2009GB2C100129) 

主　　题：猪肺炎支原体 DnaK 重组蛋白 活性鉴定 

摘      要：猪肺炎支原体(Mhp)是猪气喘病的主要病原体。利用Mhp NJ株的DnaK基因通过SOE-PC(splicing withoverlap extension PCR)R扩增和突变,获得了目的片段并插入表达载体pET-28a(+)中,然后转入宿主菌BL21(DE3)。重组质粒经1 mmol/L IPTG在37°C温度下诱导5 h,目的蛋白可达到总蛋白的14.1%。Western Blotting证明表达的重组蛋白具有猪肺炎支原体反应原性,用该重组蛋白建立的ELISA方法可检测到猪肺炎支原体抗体。此为该病基因工程疫苗抗原的筛选和ELISA诊断试剂盒的研制奠定基础。