猪圆环病毒2型通过外泌体miR-125a-5p靶向Bcl-2诱导淋巴细胞凋亡

作     者：段滇宁 沈华伟 潘艳敏 冯睿 张霖 陆灵光 刘建奎 邱龙新 陈洪博 DUAN Dianning;SHEN Huawei;PAN Yanmin;FENG Rui;ZHANG Lin;LU Lingguang;LIU Jiankui;QIU Longxin;CHEN Hongbo

作者机构：龙岩学院生命科学学院福建龙岩364012 福建省预防兽医学与生物技术高校重点实验室福建龙岩364012 动物源性人兽共患病防控福建省高校工程研究中心福建龙岩364012 福建省家畜传染病防治与生物技术重点实验室福建龙岩364012 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2022年第38卷第8期

页      面：2891-2901页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金(32102628) 中央引导地方科技发展专项项目(2019L3011) 福建省自然科学基金(2021J01568) 大学生创新创业训练项目(S202111312033) 

主　　题：miR-125a-5p 猪圆环病毒2型 外泌体 细胞凋亡 

摘      要：为研究miR-125a-5p在猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)诱导淋巴细胞凋亡中的作用及其作用机制,以PCV2感染PK-15细胞外泌体孵育的淋巴细胞为研究对象,采用流式细胞术、蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)和实时荧光定量PCR,检测淋巴细胞凋亡率及凋亡相关miRNA表达;合成miR-125a-5p模拟物和抑制物转染PK-15细胞,检测miR-125a-5p过表达或抑制表达后细胞凋亡率;采用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因检测miR-125a-5p对靶基因的调控;Western blotting检测外泌体孵育淋巴细胞的线粒体凋亡信号通路相关蛋白Bcl-2、Bax、细胞色素C和caspase-3的表达。结果显示,感染PCV2的PK-15细胞分泌的外泌体极显著提高淋巴细胞凋亡率,在一定浓度范围内呈剂量依赖性;与PCV2诱导细胞凋亡相关的miRNA中,miR-125a-5p表达量极显著升高,miR-125a-5p模拟物转染细胞后极显著提高细胞凋亡率;利用TargetScan预测发现,miR-125a-5p与Bcl-23′UTR区有结合位点,miR-125a-5p模拟物极显著抑制pmir-Bcl-23′UTR-WT荧光素酶活性,对pmir-Bcl-23′UTR-MuT的荧光素酶活性无明显改变;外泌体孵育的淋巴细胞Bcl-2表达量显著降低,Bax、细胞色素C的释放和caspase-3表达量显著升高,Bcl-2/Bax的比值极显著降低。这表明,PCV2通过外泌体诱导淋巴细胞上调miR-125a-5p的表达,进而抑制Bcl-2 mRNA和蛋白表达,激活淋巴细胞线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡。