滤纸干血斑用于脊髓性肌萎缩症基因筛查方法的建立

作     者：吴莉萍 高玲亮 杨江涛 付有晴 刘彦慧 顾茂胜 何红琴 杨艳玲 WU Li-ping;GAO Ling-liang;YANG Jiang-tao;FU You-qing;LIU Yan-hui;GU Mao-sheng;HE Hong-qin;YANG Yan-ling

作者机构：深圳爱湾医学检验实验室广东深圳518000 深圳罕见病代谢组学精准医学工程研究中心广东深圳518000 东莞市妇幼保健院产前诊断中心广东东莞523000 徐州市妇幼保健院遗传医学中心江苏徐州221000 运城市妇幼保健院遗传科山西运城044000 北京大学第一医院儿科北京100034 

出 版 物：《罕少疾病杂志》 (Journal of Rare and Uncommon Diseases)

年 卷 期：2022年第29卷第9期

页      面：1-4页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

基　　金：国家重点研发计划(2019YFC1005100) 深圳市工程研究中心(工程实验室)组建项目(F-2020-Z99-502615) 

主　　题：滤纸干血斑 脊髓性肌萎缩症 DNA提取 SMN1 新生儿筛查 最低起始量 

摘      要：目的建立滤纸干血斑基因组DNA自动化提取方法及流程,并探索其在脊髓性肌萎缩症(SMA)基因筛查中的应用。方法收集45份干血斑标本,采用打孔钳打孔后提取DNA,使用多重PCR结合荧光探针技术进行SMN1检测,考察最低起始干血斑用量。收集103份4℃不同保存时长的新生儿干血斑和17份EDTA抗凝血制备的干血斑,使用最低起始量提取DNA并检测SMN1,考察运输与保存条件对基因检测结果稳定性的影响。结果最低1片直径4mm的干血斑所提取的DNA浓度2.54~5.71ng/μL、纯度1.676~1.984,可满足SMN1检测要求。4℃避光保存1~24个月的新生儿干血斑标本,新鲜采集并经冷链运输48~72h的EDTA抗凝血及-80℃超低温冷冻保存1~2年的EDTA抗凝血制备的干血斑标本均可稳定检出SMA基因型。结论1片直径4mm的干血斑即可满足SMN1检测要求,大大降低了样本采集、保存和运输的难度和复杂程度,有利于开展大规模人群筛查,为现有新生儿筛查体系下增加SMA筛查提供了技术基础。