斑马鱼早期胚胎发育过程中IL-10表达的特点

作     者：赵砚驰 李化 李丹 孔鹏 张乙进 吴洁玲 莫大双 舒莉萍 ZHAO Yanzhi;LI Hua;LI Dan;KONG Peng;ZHANG Yijin;WU Jieling;MO Dashuang;SHU Liping

作者机构：贵州医科大学基础医学院免疫学教研室细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室贵州省再生医学重点实验室省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州贵阳550004 

出 版 物：《贵州医科大学学报》 (Journal of Guizhou Medical University)

年 卷 期：2022年第47卷第9期

页      面：1000-1006,1013页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(32160168) 贵州省科技计划项目(黔科合CXTD002,1436,4008) 

主　　题：斑马鱼 白细胞介素10 原位杂交 细胞因子类 胚胎早期发育 重组质粒构建 

摘      要：目的探讨野生型斑马鱼白细胞介素10(IL-10)在胚胎早期发育过程中的表达特点。方法在美国国家生物信息技术中心(NCBI)数据库中分别查询人类、小鼠及斑马鱼染色体中IL-10的基因位置,与Ensemble数据库中的数据进行比对,采用软件分子进化遗传分析软件(MEGA X)绘制系统进化树;收集3组72受精后小时(hpf)斑马鱼胚胎、30枚/组,提取总RNA(Total RNA)及合成互补脱氧核糖核酸(cDNA),构建斑马鱼重组质粒pCS^(2+)-IL-10,体外转录合成地高辛标记的IL-10反义RNA探针;分别收集4、6、9、12、18、24、48及72 hpf的斑马鱼胚胎75枚(25枚/组、3组),采用全胚胎原位杂交技术检测斑马鱼胚胎不同发育时间点IL-10表达及分布情况。结果野生型斑马鱼IL-10基因与人类IL-10基因相似度较高,且在进化过程中相对保守;限制性内切酶双酶切重组质粒及测序结果显示,重组质粒构建无误;全胚胎原位杂交结果显示,4~12 hpf野生型斑马鱼胚胎中未观察到阳性杂交信号,18 hpf野生型斑马鱼胚胎中后部中间细胞群观察到IL-10阳性杂交信号,24~72 hpf野生型斑马鱼胚胎胚胎头部区域IL-10广泛表达,头部背侧、心脏、眼眶以及卵黄囊背侧部位的信号尤为明显。结论斑马鱼IL-10在进化过程中具有相对保守性,在早期胚胎发育过程中IL-10有不同程度的表达,提示IL-10在斑马鱼胚胎早期发育中发挥重要作用。