小鼠CD4、CD8膜外区编码cDNA的克隆与表达

作     者：王海萍 赵丽 王健伟 贾友苏 韩金祥 洪涛 

作者机构：安徽医科大学组胚教研室合肥230032 中国疾病预防控制中心病毒预防控制所 山东省病毒学研究所/山东省医学病毒学重点实验室暨卫生部生物技术药物重点实验室济南250062 

出 版 物：《安徽医科大学学报》 (Acta Universitatis Medicinalis Anhui)

年 卷 期：2005年第40卷第1期

页      面：1-4页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：国家 863计划生物现代农业技术领域资助项目 (编号:2003AA215071) 

主　　题：抗原,D4 抗原,CD8 逆转录聚合酶链反应 

摘      要： 目的 克隆并表达小鼠CD4和CD8基因,以期制备其抗体为疫苗研究服务。方法 从小鼠脾细胞中提取总RNA,利用RT PCR技术克隆CD4、CD8α和CD8β膜外区片段的编码cDNA,利用谷光苷肽硫基转移酶 (GST)融合表达载体pGEX CS对其进行表达,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和Westernblot对重组蛋白进行鉴定。结果 以小鼠脾细胞总RNA为模板,分别扩增出小鼠CD4、CD8α和CD8β膜外区片段的编码cDNA,将其插入表达载体pGEX CS,得到重组质粒pGEX CSCD4、pGEX CSCD8α和pGEX CSCD8β。将所获表达载体转化***21,用IPTG诱导表达,SDS PAGE检测表明小鼠CD4、CD8α、CD8β片段均得到成功表达,其表达量可占菌体蛋白总量的 30%左右,且均可与抗GST抗体反应。结论 成功克隆、表达了小鼠CD4、CD8α和CD8β,为进一步制备抗体从而用于免疫学研究打下了基础。