RNA干扰沉默PIN1对肺癌A549细胞增殖、细胞周期和成瘤的影响

作     者：谈进 李士亭 邱明玲 方友平 TAN Jin;LI Shi-ting;QIU Ming-ling;FANG You-ping

作者机构：南京医科大学附属淮安第一人民医院胸外科江苏淮安223300 

出 版 物：《中国肿瘤生物治疗杂志》 (Chinese Journal of Cancer Biotherapy)

年 卷 期：2010年第17卷第4期

页      面：403-407页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主　　题：RNA干扰 PIN1基因 肺肿瘤 增殖 

摘      要：目的:应用RNA干扰技术沉默肺癌A549细胞中PIN1(protein interacting with N1MA1)基因的表达,探讨其对A549细胞增殖、细胞周期和裸鼠成瘤能力的影响。方法:构建靶向PIN1基因的shRNA真核表达质粒pGPU6-GFP-Neo-PIN1和无义对照质粒pGPU6-GFP-Neo,以脂质体法转染A549细胞,G418筛选稳定沉默PIN1基因的细胞株。Real-time PCR和Western blotting验证PIN1基因在mRNA和蛋白水平的表达,MTT法和流式细胞术检测A549细胞增殖和细胞周期分布。将稳定沉默PIN1的A549细胞与对照细胞皮下接种裸鼠,观察接种后肿瘤生长情况。结果:成功构建了pGPU6-GFP-Neo-PIN1载体,转染A549细胞并筛选获得稳定克隆。稳定转染pGPU6-GFP-Neo-PIN1的A549细胞中PIN1mRNA表达量较pGPU6-GFP-Neo转染组下降了89.3%;蛋白表达同时也显著抑制。PIN1基因沉默组的A549细胞增殖速率明显下降(P0.01),细胞出现G1期阻滞。小鼠体内实验显示,PIN1沉默的A549细胞在裸鼠体内成瘤能力降低(P0.01)。结论:pGPU6-GFP-Neo-PIN1质粒稳定转染肺癌A549细胞能有效沉默PIN1基因的表达,从而抑制A549细胞的增殖、影响细胞周期和抑制成瘤能力。