国槐SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选

作     者：孙荣喜 宗亦臣 郑勇奇 

作者机构：国家林木遗传育种重点试验室国家林业局林木培育重点实验室中国林业科学研究院林业研究所国家林业局植物新品种分子测试实验室北京100091 

出 版 物：《广西林业科学》 (Guangxi Forestry Science)

年 卷 期：2014年第43卷第4期

页      面：343-350页

学科分类：0710[理学-生物学] 090701[农学-林木遗传育种] 0907[农学-林学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：国家林业公益性行业科研专项重大项目(201204307) "十二五"国家科技支撑计划项目(2013BAD01B06) 

主　　题：国槐 体系优化 引物筛选 毛细管电泳 正交设计 

摘      要：为建立国槐(Sophora japonica)最佳SRAP-PCR反应体系,采用正交试验设计L16(45)对影响PCR体系的5个因素(模板浓度、引物浓度、Mg2+浓度、Taq聚合酶和d NTP用量)4个水平进行了优化,确定了国槐的最优SRAP-PCR反应体系:Taq聚合酶1.5 U,d NTPs 0.30 mmol/L,模板DNA 90 ng,Mg2+2.0 mmol/L,引物0.3μmol/L,dd H2O补至20μL。各因素对PCR反应的影响从大到小依次为:Taq聚合酶d NTPs模板DNAMg2+引物。基于最佳SRAP体系,采用4个品种对120对引物进行筛选,共获得12对多态性好的引物组合。随机抽取两对引物基于毛细管电泳技术对此体系进行稳定性检验,扩增条带清晰、稳定、多态性高。该体系的建立以及筛选的引物组合为为进一步利用SRAP技术对国槐的遗传多样性、品种鉴定等方面的研究奠定基础。