CREB激活促进神经痛大鼠脊髓背角HCN4转录的实验研究

作     者：王蓉 万琪 谢晔 徐陶 曾俊伟 刘晓红 Wang Rong;Wan Qi;Xie Ye;Xu Tao;Zeng Junwei;Liu Xiaohong

作者机构：遵义医科大学生理学教研室贵州遵义563099 

出 版 物：《遵义医科大学学报》 (Journal of Zunyi Medical University)

年 卷 期：2023年第46卷第1期

页      面：7-13页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071006[理学-神经生物学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(NO:31860291,81960161) 2018年贵州省教育厅创新群体重大研究项目(NO:黔教合KY字025) 

主　　题：脊髓背角 环磷腺苷效应元件结合蛋白 疼痛 超极化激活环核苷酸门控的阳离子通道4 电泳迁移率实验 

摘      要：目的探讨CREB激活促进神经痛大鼠脊髓背角HCN4转录的信号机制。方法雄性成年SD大鼠随机分为6组:Sham组,Sham+Vehicle组,CCI+Vehicle组,CCI+H-89(PKA抑制剂),CCI+KN-93(CaMKⅡ抑制剂),CCI+Naphthol AS-E(CREB抑制剂)。各组大鼠在CCI术后分别注射0.005%DMSO、H-89、KN-93或Naphthol AS-E,在CCI术前,术后1、3、5、7 d检测各组大鼠给药1 h后的机械刺激缩足反射阈值(MWT);实时荧光定量PCR检测HCN4 mRNA表达;Western blot检测脊髓(L_(4)~L_(6))背角HCN4、PKA、p-PKA、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、CREB和p-CREB表达;EMSA检测CREB与HCN4启动子的DNA结合活性。结果与Sham组相比,CCI+Vehicle组在1、3、5、7 d的MWT显著降低(P0.05),脊髓背角HCN4 mRNA表达明显上调(P0.05),HCN4、PKA、p-PKA、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、CREB和p-CREB蛋白表达明显上调(P0.05);与CCI+Vehicle组相比,H-89、KN-93或Naphthol AS-E抑制剂组MWT显著上调(P0.05),HCN4、PKA、p-PKA、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、CREB和p-CREB蛋白表达显著下降(P0.05),HCN4 mRNA表达显著减少(P0.05);与Sham组相比,CCI+Vehicle组背角CREB与HCN4启动子的DNA结合活性升高,但H-89、KN-93或Naphthol AS-E处理后CREB与HCN4启动子的DNA结合活性减弱。结论神经痛大鼠脊髓背角PKA和CaMKII激活,导致转录因子CREB与HCN4基因启动子结合,促进HCN4转录和蛋白表达。