EGCG-exosomes通过miR-30a/Beclin-1轴抑制自噬减轻心肌缺血/再灌注损伤

作     者：张宁 甘晓雯 陈玲琳 喻秋婷 李海琦 李玉雪 简洁 Zhang Ning;Gan Xiaowen;Chen Linglin;Yu Qiuting;Li Haiqi;Li Yuxue;Jian Jie

作者机构：广西糖尿病系统医学重点实验室桂林541199 桂林医学院第二附属医院桂林541199 

出 版 物：《广西医科大学学报》 (Journal of Guangxi Medical University)

年 卷 期：2023年第40卷第2期

页      面：236-244页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.82060659,No.81760726) 广西自然科学基金资助项目(No.2018GXNSFAA050035) 

主　　题：EGCG-exosomes 缺血/再灌注损伤 自噬 miR-30a/Beclin-1 

摘      要：目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)预处理心肌细胞分泌的外泌体(exosomes)对心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的作用及分子机制。方法:体外培养H9c2心肌细胞,给予或不给予EGCG预处理,建立缺氧/复氧模型。提取、纯化外泌体,采用在体基因干扰或基因敲除技术,构建antagomiR-30a和Beclin-1^(+/-)小鼠,建立I/R模型,缺血30 min心肌注射外泌体,研究EGCG预处理心肌细胞分泌的exosomes(EGCG-exosomes)对I/R的作用。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-30a与Beclin-1的相互作用,TTC染色法检测心肌梗死面积,苏木精—伊红(HE)染色观察心肌细胞形态变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清心肌肌钙蛋I(cTnI)含量;透射电子显微镜观察自噬小体数量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、蛋白印迹法(western blotting法)检测miR-30a与自噬相关基因和蛋白的表达。结果:与I/R组相比,exosomes组自噬体数量减少,心肌损伤减轻。与exosomes组相比,EGCG-exosomes组心肌梗死面积缩小,cTnI含量降低,自噬体数量减少,Beclin-1和LC3-Ⅱ基因及蛋白表达下调,cathepsin D蛋白表达下调,p62基因及蛋白表达上调;沉默miR-30a促进心肌I/R自噬发生,给予EGCGexosomes则逆转上述作用;此外,敲低Beclin-1与EGCG-exosomes有协同抑制自噬作用(均P0.05)。结论:EGCG-exosomes通过miR-30a/Beclin-1轴抑制自噬,减轻心肌I/R损伤。