抑制Caspase-8基因表达对减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用

作     者：陈栋 朱珉 郭晖 刘斌 陈刚 张伟杰 陈知水 陈实 CHEN Dong;ZHU Min;GUO Hui;LIU Bin;CHEN Gang;ZHANG Wei-jie;CHEN Zhi-shui;CHEN Shi

作者机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部/教育部器官移植重点实验室武汉430030 

出 版 物：《中华器官移植杂志》 (Chinese Journal of Organ Transplantation)

年 卷 期：2009年第30卷第11期

页      面：678-681页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：教育部留学回国人员科研启动基金 

主　　题：肝脏 再灌注损伤 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8 RNA干扰 

摘      要：目的观察抑制半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶8（Caspase-8）基因的表达对减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用。方法构建针对大鼠Caspase-8基因的短发夹状RNA（shRNA）真核表达载体。将Lewis大鼠随机分为3组，每组8只。（1）假手术组：麻醉后，取腹部正中切口，缝合关腹；（2）磷酸盐缓冲液（PBS液）组：阻断肝门血流前48h经门静脉注射PBS液1ml，然后行肝脏缺血再灌注；（3）shRNA组：阻断肝门血流前48h经门静脉注射Caspase-8 shRNA 50μg（总体积为1m1），然后行肝脏缺血再灌注。肝脏缺血再灌注的方法为阻断大鼠70％入肝血流40min。于再灌注6h、12h、24h、3d、5d、7d时检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）水平；检测肝组织中Caspase-8 mRNA的表达、细胞凋亡情况、丙二醛（MDA）以及超氧化物岐化酶（SOD）的含量。结果与PBS液组比较，shRNA组再灌注6、12、24h，血清中A11、和AST水平显著降低（P〈0．05）；肝组织中Caspase-8mRNA水平、肝细胞凋亡指数（shRNA组和PBS液组分别为22．33％±4．28％和35．24％±2．33％）以及肝组织中MDA含量[shRNA组和PBS液组分别为（94．5±11．2）nmol／mg和（133．5±12．4）nmol／mg]均显著降低（P〈0．05），而肝组织中SOD活性显著升高[shRNA组和PBS液组分别为（21．6±3．7）U／mg和（12．2±3．1）U／mg，P〈0．05]。结论通过RNA干扰Caspase-8基因的表达可以抑制肝细胞凋亡的发生，减轻肝脏缺血再灌注损伤。