响应曲面法优化心肌肌钙蛋白I在***中表达及纯化

作     者：杨磊 张春明 王德芝 YANG Lei;ZHANG Chun-ming;WANG De-zhi

作者机构：中国医学科学院/北京协和医学院放射医学研究所天津市分子核医学重点实验室天津300192 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2009年第29卷第10期

页      面：28-32页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：天津市自然科学基金(重点项目)(08JCZDJC16200)资助项目 

主　　题：心肌肌钙蛋白(cTnI)响应曲面设计(RSM)离子交换层析 

摘      要：为优化已构建表达人心肌肌钙蛋白I(cTnI)基因工程菌的表达条件,获得纯度较高的cTnI作为抗原用于研制临床上检测心肌梗塞的试剂盒;通过PBD(Plackett Burman Design)设计,考察各因素对目的蛋白cTnI表达的影响,证明诱导时间、pH、KCl浓度是影响最大的三个因素,通过响应曲面法(RSM)优化对cTnI表达影响最大的三个因素,构建回归方程预测cTnI的表达所占总蛋白的百分比,在最优条件下目的蛋白表达所占菌体总蛋白含量的26%。经过硫酸氨沉淀和DEAE-Cellulose离子交换层析,将重组的cTnI蛋白进行纯化,经SDS-PAGE检测后,目的蛋白只有一条带;经Western-blottting和临床检测cTnI试剂盒检测后,证明纯化的cTnI有良好的特性,可以作为免疫动物的抗原,制备特异性强,亲和力好的单克隆抗体,也可以作为临床上标定不同cTnI检测方法的校准物。