ZNF24基因过表达慢病毒载体的构建及其在人结直肠癌HCT116细胞中的表达

作     者：田硕 厉建中 TIAN Shuo;LI Jianzhong

作者机构：海军军医大学药学系生化药学教研室上海200433 

出 版 物：《药学实践与服务》 (Journal of Pharmaceutical Practice and Service)

年 卷 期：2023年第41卷第4期

页      面：222-226页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81570557 30871353) 

主　　题：ZNF24 结直肠癌 慢病毒载体 

摘      要：目的通过构建ZNF24基因过表达慢病毒载体,建立ZNF24基因过表达的人结直肠癌HCT116细胞株,为开展后续研究提供物质基础。方法通过PCR扩增ZNF24基因序列片段和3FLAG标签序列片段,并将两产物通过同源重组克隆至慢病毒载体pMT406中,构建成重组表达ZNF24慢病毒质粒pMT-ZNF24。将重组质粒pMT-ZNF24与辅助包装载体质粒pCMV-dR8.9和pCMV-VSV-G一起共转染293T细胞并收集慢病毒。应用孔稀释法检测病毒滴度,用qRT-PCR和蛋白印迹法检测慢病毒转染HCT116细胞后ZNF24的表达水平。结果成功构建了重组载体pMT-ZNF24,并获得相应的病毒,病毒滴度为3.25×10^(9) TU/ml。转染重组ZNF24慢病毒的HCT116细胞中ZNF24表达水平显著高于空白组和阴性对照组细胞。结论构建了ZNF24基因过表达慢病毒载体,并获得相应的病毒和稳定表达ZNF24的HCT116细胞株。