粉尘螨谷氧还蛋白-1样蛋白基因原核表达质粒的构建及结构分析

作     者：任雅宁 周鹰 袁存银 周冬梅 廖媛芬 强士豪 罗金丹 崔玉宝 REN Yaning;ZHOU Ying;YUAN Cunyin;ZHOU Dongmei;LIAO Yuanfen;QIANG Shihao;LUOJindan;CUI Yubao

作者机构：南京医科大学附属无锡人民医院临床研究中心江苏无锡214023 南京医科大学附属儿童医院儿科实验室 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2023年第18卷第6期

页      面：672-676,682页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金顶目(No.81971511,31572319,31272369) 无锡市太湖人才计划高端人才项目(No.2020THRC-GD-7) 无锡市科技局“太湖之光”科技攻关项目(No.Y20212006) 无锡市卫生计生科研重大项目(No.Z201701) 

主　　题：粉尘螨 谷氧还蛋白-1样蛋白 生物信息学 基因克隆 

摘      要：目的获得粉尘螨谷氧还蛋白-1样蛋白(Glutaredoxin-1,Grx1)的编码基因并构建表达质粒,对该基因及其编码蛋白质进行结构预测。方法以粉尘螨总RNA为模板,RT-PCR扩增获得编码基因后插入原核表达载体pET28a(+),构建的重组质粒转化入*** BL21(DE3)感受态细胞中,用异丙基-b-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-Dthiogalactoside,IPTG)诱导表达,SDS-PAGE分析表达产物。采用生物信息学软件分析该基因及其编码蛋白的结构等生物学特征。结果获得的粉尘螨Grx1编码基因全长315bp,构建的原核表达质粒pET28a(+)-Grx1转化入大肠埃希菌感受态细胞后经IPTG诱导,表达相对分子质量为25.9×10^(3)的重组蛋白。生物信息学分析该基因编码的蛋白质由104个氨基酸组成,主要分布于细胞核(占87.0%)。该蛋白含有11个潜在磷酸化位点(4个苏氨酸,6个丝氨酸和1个酪氨酸),二级结构为α-螺旋(45.19%)、无规则卷曲(31.73%)、延伸链(14.42%)和β-转角(8.65%)。将该基因推导出的编码氨基酸序列进行Blast获得同源基因与屋尘螨谷胱甘肽样C8样蛋白(Dermatophagoides pteronyssinus glutaredoxin-C8-like)同源性最高(83.52%)。结论获得了粉尘螨Grx1的编码基因及其原核表达质粒,生物信息学分析该蛋白含有潜在的磷酸化位点且主要分布于细胞核,可为该基因的生理功能研究及粉尘螨的防制提供参考。