LED红光上调MAPK信号促进炎性环境中人牙髓干细胞成骨/成牙本质分化

作     者：刘源 惠以宁 姜冰 郑艮子 王瑶 LIU Yuan;HUI Yining;JIANG Bing;ZHENG Genzi;WANG Yao

作者机构：西南医科大学附属口腔医院预防保健科四川泸州646000 西南医科大学口腔医学研究所四川泸州646000 口颌面修复重建和再生泸州市重点实验室四川泸州646000 西南医科大学四川泸州646000 

出 版 物：《口腔疾病防治》 (Journal of Prevention and Treatment for Stomatological Diseases)

年 卷 期：2023年第31卷第10期

页      面：701-711页

学科分类：1003[医学-口腔医学] 10[医学] 

基　　金：四川省科技计划联合创新专项任务项目(2022YFS0634) 四川省科研课题计划项目(S21015) 西南医科大学校级课题项目(2021ZKMS013) 

主　　题：人牙髓干细胞 脂多糖 炎性环境 发光二极管 红光 成骨/成牙本质分化 MAPK信号通路 成骨细胞特异性转录因子 牙本质基质蛋白-1 牙本质涎磷蛋白 

摘      要：目的探讨发光二极管(light-emitting diode,LED)红光对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)成骨/成牙本质分化的影响及机制。方法本实验研究已通过单位伦理委员会审查批准。组织块酶消化法培养hDPSCs,在0、1、5、10μg/mL脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下,CCK-8法检测hDPSCs增殖,筛选LPS刺激浓度。设置CG组(矿化诱导)、LPS+CG组、LPS+CG+LED光照组(能量分别为2、4、6、8、10 J/cm^(2))。第7天进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及活性测定,实时荧光定量PCR检测ALP、成骨细胞特异性转录因子(osterix,OSX)、牙本质基质蛋白-1(dentin matrix protein-1,DMP-1)、牙本质涎磷蛋白(dentin sialo-phosphoprotein,DSPP)基因表达情况,第21天进行茜素红染色及钙结节定量分析,筛选最佳光照能量。设置LPS+CG组、LPS+CG+LED组(最佳能量),ELISA法检测第1、3、5、7天肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白介素-1β(interlenkin-1β,IL-1β)表达量。Western blot法检测细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases 1/2,ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、p38、细胞外调节蛋白激酶5(extracellular regulated protein kinases 5,ERK5)及磷酸化蛋白表达。分别阻断ERK1/2、JNK、ERK5、p38通路后,Western blot法检测第7天ALP、OSX、DMP-1、DSPP蛋白表达。结果CCK-8结果显示10μg/mL LPS诱导下,在第5、7天hDPSCs增殖低于0、1、5μg/mL LPS组(P0.05)。结论LED红光促进炎症环境下hDPSCs成骨/成牙本质分化,其作用机制可能为通过上调ERK1/2、JNK、ERK5信号减少炎症因子TNF-α与IL-1β释放有关。