大豆转化体E8A7027外源T-DNA分析及特异性检测体系建立

作     者：闫伟 马月 谢彦博 董立明 龙丽坤 李葱葱 张玲 李飞武 YAN Wei;MA Yue;XIE Yanbo;DONG Liming;LONG Likun;LI Congcong;ZHANG Ling;LI Feiwu

作者机构：吉林省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所吉林长春130033 

出 版 物：《大豆科学》 (Soybean Science)

年 卷 期：2023年第42卷第5期

页      面：579-585页

学科分类：09[农学] 0901[农学-作物学] 

基　　金：吉林省农业科技创新工程项目(CXGC2021TD021) 

主　　题：转基因大豆 高通量测序 旁侧序列 微滴式数字PCR 转化体特异性检测 

摘      要：为进一步分析转AgGlpF基因耐盐转基因大豆E8A7027转化体的分子特征信息并对其进行特异性检测,本研究分离该转化体的旁侧序列并建立其特异性PCR检测体系。基于基因组重测序技术并结合Sanger测序技术,将基因组重测序分析获得的序列信息与参考大豆基因组进行对比,确定E8A7027转化体的T-DNA区在大豆基因组上的插入位点及其5′端和3′端的旁侧序列。根据旁侧序列设计PCR检测引物,并对检测体系的特异性、灵敏度进行实验室内验证。结果显示:转基因大豆E8A7027的整合位点为Chr09染色体的33886331位点,整合方式为单拷贝插入,受体基因组DNA在插入位点缺失了1段58 bp序列,分别获得E8A7027大豆的5′端旁侧序列910 bp和3′端旁侧序列802 bp。根据这两个旁侧序列设计引物建立的PCR检测方法,能够特异性地将E8A7027大豆转化体与其他转基因作物和非转基因大豆区分开,方法的检测灵敏度为0.05%。研究结果可为E8A7027转化体的安全评价和监管检测提供技术支撑。