马蹄内翻足大鼠模型踝部骨骼、组织及脊髓蛋白质组学分析

作     者：李增刚 纪虹 富伟能 赵彦艳 金春莲 吉士俊 孙开来 LI Zeng-gang;JI Hong;FU Wei-neng;ZHAO Yan-yan;JIN Chun-lian;JI Shi-jun;SUN Kai-lai

作者机构：中国医科大学医学遗传学教研室沈阳110001 中国医科大学附属第二医院小儿骨科沈阳110001 中国医科大学国家沈阳新药安全评价研究中心沈阳110001 

出 版 物：《中华医学遗传学杂志》 (Chinese Journal of Medical Genetics)

年 卷 期：2007年第24卷第1期

页      面：52-58页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：国家重点基础研究发展规划(2001CB510301) 

主　　题：先天性马蹄内翻足 全反式维甲酸 双向电泳 质谱 凋亡 

摘      要：目的 应用全反式维甲酸（all-trans retinoic acid，ATRA）诱发Wistar大鼠马蹄内翻足模型为实验材料，应用蛋白质学技术探讨先天性马蹄内翻足发病机理。方法 按135mg／kg体重经口给予孕10天Wistar大鼠ATRA，孕21天剖检胎鼠，提取畸形鼠和对照鼠脊髓、踝部组织（去除皮肤）及踝部骨骼总蛋白，双向电泳分离蛋白，考马斯亮蓝染色，PDQuest软件、质谱及生物信息学分析差异蛋白。应用半定量逆转录P（鼠检测马蹄内翻足畸形鼠和对照鼠脊髓、踝部骨骼和胫骨后肌群组织Map、col2a1、tnnt1和ngfr基因表达。应用免疫组化染色检测Xiap蛋白表达。应用TUNEL法进行脊髓、踝部骨骼细胞凋亡检测。结果 经双向电泳发现马蹄内翻足模型胎鼠多种蛋白质表达存在差异，质谱及生物信息学进一步分析发现Ⅱ型胶原蛋白等16种蛋白表达发生改变。逆转录PCR检测进一步证实xiap、col2a1在脊髓、踝部骨骼和胫骨后肌群组织表达下调，tnnt1在踝部骨骼和胫骨后肌群组织表达下调，ngfr在以上组织表达无异常。免疫组化染色进一步证实Xiap蛋白表达下调。神经、骨骼细胞凋亡发生率是对照组细胞凋亡发生率的5．4和10倍。结论 马蹄内翻足大鼠模型踝部组织（去除皮肤）、踝部骨骼及脊髓多种蛋白质存在表达差异。Xiap、C0l2a1和sTnT与马蹄内翻足相关，Ngfr与马蹄内翻足无关。ATRA可以诱导脊髓、骨骼凋亡发生率升高，与Xiap表达下调有关，在马蹄内翻足发生过程中发挥重要作用。