细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶基因的生物信息学分析及原核表达

作     者：赵文卿 薄新文 普娜 张玉霞 陈旭珂 张艳艳 孙艳 齐萌 王正荣 ZHAO Wenqing;BO Xinwen;PUNa;ZHANG Yuxia;CHEN Xuke;ZHANG Yanyan;SUN Yan;QI Meng;WANG Zhengrong

作者机构：塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院畜牧兽医研究所 石河子大学动物科技学院 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2024年第19卷第5期

页      面：555-561页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(No.32360887,31860701) 新疆生产建设兵团重点领域科技攻关计划项目(No.2020AB025) 新疆生产建设兵团国际科技合作(No.2021BC008) 省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室重大专项(No.2021ZD02) 兵团农业科技创新工程专项(No.NCG202213) 

主　　题：细粒棘球绦虫 EgLDH基因 生物信息学分析 原核表达 

摘      要：目的了解细粒棘球绦虫的乳酸脱氢酶蛋白基因的生物信息学特性,并进行原核表达。方法利用NCBI网站登录的细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶基因序列设计特异性引物和qRT-PCR引物,使用PCR扩增细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶基因,使用荧光定量法检测细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶在不同发育阶段的相对表达量,使用生物信息学软件对细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶蛋白进行分析;构建重组pET28a-EgLdh质粒,转进大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,利用SDS-PAGE检测蛋白的表达,并通过Western blot对蛋白进行免疫原性分析;利用原核表达重组pET28a-EgLDH蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,通过间接免疫荧光分析其在虫体上的分布。结果生物信息学分析发现EgLDH全长996 bp,编码331个氨基酸,分子式为C_(1575)H_(2561)N_(425)O_(470)S_(17),相对分子质量为35516.25,理论等电点为6.32,不稳定指数为27.96,显示为稳定蛋白,脂肪系数为106.83,亲水性为0.236,为疏水性蛋白,有13个潜在的B细胞抗原表位;通过双酶切鉴定及测序分析证明,pET28a-EgLDH重组质粒构建成功。重组质粒pET28a-EgLDH转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞后使用IPTG成功诱导表达蛋白,分子质量约为40 ku,Western blot结果显示,重组蛋白能被感染棘球蚴的犬阳性血清识别,表明其均具有良好的反应原性。EgLDH在细粒棘球绦虫阶段的相对转录水平显著高于原头蚴阶段。间接免疫荧光分析显示其定位在原头蚴的表皮层。结论rEgLDH具有较好的免疫活性,是一种潜在的疫苗候选抗原。