IGF-1基因克隆及其产物的测序鉴定

作     者：曹尚美 邹真真 陈泊霖 杨少哲 张清伟 王单单 王浩然 付秀虹 CAO Shangmei;ZOU Zhenzhen;CHEN Bolin

作者机构：漯河市中心医院科创中心/漯河医学高等专科学校第一附属医院/河南省生育力保护与优生重点实验室河南漯河462000 

出 版 物：《科技创新与应用》 (Technology Innovation and Application)

年 卷 期：2024年第14卷第16期

页      面：7-11页

学科分类：0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 0711[理学-系统科学] 07[理学] 08[工学] 

基　　金：河南省自然科学基金(2223000420247) 2023年河南省博士后科研资助项目(312145) 中央引导地方项目(Z20221343023) 河南省重点研发与推广专项(212102310813、222102310361) 河南省医学科技攻关项目(LHGJ20221031) 漯河医学高等专科学校科技创新项目(2023ZD18) 

主　　题：IGF-1基因 质粒克隆 基因过表达 质粒的扩增 基因治疗应用 

摘      要：基因过表达在基础实验和基因治疗应用中都是常用的手段,而质粒的扩增在基因过表达过程中是不可或缺的技术,如何规范、高效地对质粒进行扩增和提取是基因治疗应用的前提,也是困扰很多基础研究人员的难题。利用现有的实验技术,在降低实验成本基础上,建立过表达质粒扩增、提取的最优方案。首先采用传统方法制作LB培养基和感受态细胞,对转化后的质粒进行大量扩增培养,之后使用商业试剂盒对质粒进行提取,反复试验后对商业试剂盒质粒提取过程进行优化,提高效率,最终获得高纯度和浓度的质粒溶液。经超微量分光光度计、琼脂糖凝胶电泳检测和sanger测序等多种方式检测验证后与NCBI数据库中目标基因序列一致,提示扩增、提取成功。经优化后的质粒扩增、提取方案标准、高效,成本低廉,是质粒基因克隆的最佳选择。