抗人血管内皮生长因子发夹状核酶基因真核表达载体的构建及其对靶mRNA的切割

作     者：严瑞兰 钱新华 金明 惠宏襄 辛晓燕 王剑波 

作者机构：第四军医大学西京医院妇产科陕西西安710032 第一军医大学南方医院小儿科广东广州510060 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学病理教研室陕西西安710032 

出 版 物：《癌症》 (Chinese Journal of Cancer)

年 卷 期：2001年第20卷第5期

页      面：542-543页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目No:39700147 

主　　题：血管内皮生长因子 发夹状核酶 真核表达载体 mRNA 卵巢癌 基因治疗 

摘      要：肿瘤的生长和转移需要血管形成，现已发现有多种生物因子参与其形成过程。而血管内皮生长因子（ vascular endothelial growth factor, VEGF）被认为是最重要的血管生成因子之一，在肿瘤的生长与转移中起重要作用 [1]。我们曾在卵巢癌中发现有 VEGF的高表达 [2]，因此，我们自行设计和构建了针对 VEGF mRNA的发夹状核酶基因的真核表达载体，试图采用核酶（ ribozyme）技术抑制 VEGF的表达，以探讨卵巢癌基因治疗的新途径。 1 材料和方法 1． 1 菌种、质粒和试剂 大肠杆菌 DH5α、真核表达载体 pcDNA3由第四军医大学生化教研室提供。限制性内切酶及 T4 DNA连接酶等购自原平公司。 1． 2 抗人 VEGF核酶基因的合成 针对人 VEGF mRNA第三外显子，设计并合成抗人 VEGF发夹状核酶基因的两条互补单链。为便于克隆和鉴定，该基因的 5′端及 3′端分别设有 BamH I和 EcoR I酶切位点和两个保护碱基，共 66个碱基对。核酶基因两条链的序列为： V1， 5′ -CGG GAT CCC TGA TAA GAA TCC AAC CAG AGA AAC ACA CGT TGT GGT ATA TTA CCT GGT AGA ATC CCG-3′； V2， 5′ -CGG AAT TCT ACC AGG TAA TAT ACC ACA ACG TGT GTT TCT CTG GTT GGA TGT CTA TCA GGG ATC CCG-3′