人肿瘤坏死因子受体的配体胞外段的原核表达及分析

作     者：焦艳丽 郑纺 李晓霞 王宝利 郭善一 Yanli Jiao;Fang Zheng;Xiaoxia Li;Baoli Wang;Shanyi Guo

作者机构：天津医科大学代谢病医院内分泌研究所天津300070 天津医科大学基础医学院微生物学教研室天津300070 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2009年第25卷第5期

页      面：708-713页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.30300171) 天津市高等学校科技发展基金项目(No.20060207)资助 

主　　题：GITRL 原核表达 报道基因 偏嗜性 限制性内切酶Eco31I 

摘      要：新近报道糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体的配体(GITRL)具有抑制前体破骨细胞的作用,故命名为Osteostat,为深入研究其功能和机制,本研究原核表达人GITRL胞外段并进行活性分析。利用限制性内切酶Eco31I获得大肠杆菌偏嗜性GITRL的胞外段cDNA序列,构建了基于pQE-30Xa的原核表达载体,并在M15[pREP4]菌株中经IPTG诱导表达带有His融合标签的GITRL重组蛋白,主要以包涵体形式存在。经体外包涵体变性、复性及纯化后,采用SDS-PAGE和Western blotting进行分析和鉴定。同时建立了报告基因技术检测GITRL重组蛋白生物活性的方法,简单便捷、灵敏而且周期短,利用此方法分析了重组GITRL胞外段表达蛋白的生物活性。