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小鼠CYP2E1基因靶向miRNA表达载体的构建及鉴定

Construction and Identification of miRNA Expression Vector Targeting on Mouse CYP2E1

作     者:张伟 李小颖 张连峰 ZHANG Wei;LI Xiao-ying;ZHANG Lian-feng

作者机构:中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京100021 

出 版 物:《中国比较医学杂志》 (Chinese Journal of Comparative Medicine)

年 卷 期:2009年第19卷第6期

页      面:9-12,I0006页

学科分类:1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基  金:实验动物和人类疾病动物模型资源扩展(200802036) 

主  题:CYP2E1 微小RNA RNA干扰 

摘      要:目的设计并构建靶向小鼠CYP2E1基因的miRNA干扰质粒,为探索CYP2E1基因功能奠定基础。方法应用invitrogen设计软件设计两条干扰小鼠CYP2E1基因的靶向miRNA序列,合成相应的回文DNA序列,退火后分别连接到pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR载体上,构建两套miRNA真核表达载体CYP2E1-miR1和CYP2E1-miR2,并使用该载体特有的串联方法将两载体上的miRNA前体寡核苷酸序列进行串联成为CYP2E1-miR1-miR2;将上述重组载体分别与构建的pcDNA3.1(+)-CYP2E1表达质粒共转染入293T细胞,RT-PCR法鉴定其干扰效果。结果经酶切及测序鉴定,针对鼠CYP2E1基因的miRNA干扰质粒构建成功,并能够有效抑制共转染入293T细胞的pcDNA3.1(+)-CYP2E1质粒的表达,且串联质粒CYP2E1-miR1-miR2优于单独的干扰质粒CYP2E1-miR1及CYP2E1-miR2。结论小鼠CYP2E1基因的靶向miRNA表达载体构建成功。

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