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内蒙古自治区呼和浩特市赛罕区大学西街235号 邮编: 010021
作者机构:湖南师范大学生命科学院长沙410081
出 版 物:《中国生物化学与分子生物学报》 (Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology)
年 卷 期:2010年第26卷第4期
页 面:369-373页
核心收录:
学科分类:0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学]
摘 要:本研究采用RT-PCR法从293T细胞中克隆得到PA28γcDNA全长序列,并将该片段亚克隆到pMD-18T载体中,利用定点突变获得核定位序列缺失突变的PA28γ突变体,分别将野生型(WT)和突变型(MT)PA28γ基因克隆到真核表达载体pDsRed1-C3中,脂质体法转染293T细胞,荧光显微镜观察发现,在293T细胞中,PA28γWT定位在胞核中,而PA28γMT定位在胞浆中;再将野生型和突变型PA28γ基因分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)Flag中,用脂质体法將其转染HepG2細胞.Western印迹检测结果表明,PA28γWT和PA28γMT蛋白在HepG2细胞中获得了高效表达,建立了高表达PA28γWT和PA28γMT蛋白的HepG2细胞系.这些结果的获得,为进一步研究人类PA28γ基因的功能奠定了基础.