基于自噬角度探究A2AR对内毒素诱导的Caco-2肠上皮细胞炎性损伤的影响

作     者：陈禺 王小吉 李合 Chen Yu;Wang Xiaoji;Li He

作者机构：海南医学院第一附属医院普通外科海口570000 海南医学院第一附属医院肝胆外科海口570000 

出 版 物：《安徽医科大学学报》 (Acta Universitatis Medicinalis Anhui)

年 卷 期：2024年第59卷第9期

页      面：1636-1642页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：海南省卫生健康行业科研项目(编号:22A200079) 

主　　题：腺苷A2A受体 Caco-2肠上皮细胞 炎症性肠病 脂多糖 细胞损伤 自噬 

摘      要：目的探究腺苷A2A受体(A2AR)对内毒素脂多糖(LPS)诱导的Caco-2肠上皮细胞炎性损伤的影响及机制。方法首先将Caco-2细胞分为对照组、LPS组(10μg/ml LPS处理12 h)、A2AR激动剂(CGS21680)组(10μmol/L CGS21680预处理10 min)、CGS21680+LPS组(10μmol/L CGS21680预处理10 min、10μg/ml LPS处理12 h),CCK-8法测定各组细胞活力,ELISA法测定各组细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的分泌水平,实时荧光定量PCR检测各组细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表达水平,Western blot分析各组细胞中自噬相关蛋白微管相关轻链蛋白3(LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ、自噬相关蛋白(Beclin1)的蛋白表达水平;再将Caco-2细胞分为对照组、LPS组(10μg/ml LPS处理12 h)、CGS21680+LPS组(10μmol/L CGS21680预处理10 min、10μg/ml LPS处理12 h)、CGS21680+LPS+雷帕霉素(Rapa)组(10μmol/L CGS21680预处理10 min、10μg/ml LPS与5μmol/L Rapa处理12 h),CCK-8法测定各组细胞活力,ELISA法测定各组细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌水平。结果与对照组比较,LPS组Caco-2细胞活力显著降低(P0.05),上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平显著升高(P0.05),细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA相对表达量均显著上调(P0.05),并检测到LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值与Beclin1蛋白相对表达量显著上调(P0.05);与LPS组比较,CGS21680+LPS组Caco-2细胞活力显著升高(P0.05),上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平显著降低(P0.05),细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA相对表达量均显著下调(P0.05),且LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值与Beclin1蛋白相对表达量显著下调(P0.05);此外,与CGS21680+LPS组比较,CGS21680+LPS+Rapa组Caco-2细胞活力又显著降低(P0.05),上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平也显著升高(P0.05)。结论使用A2AR激动剂能够减轻内毒素LPS诱导的Caco-2肠上皮细胞炎性损伤,提高细胞活力,这可能与其抑制自噬水平有关。