八色流式细胞术检测急性B淋巴细胞白血病微小残留病方法的建立

作     者：王璐璐 王建中 屈晨雪 王卉 刘抗援 龚岩 邢莹 伍平 WANG Lu-lu;WANG Jian-zhong;QU Chen-xue;WANG Hui;LIU Kang-yuan;GONG Yan;XING Ying;WU Ping

作者机构：北京大学第一医院检验科100034 北京市道培医院流式细胞室 北京军区总医院血液科 北京市道培医院形态室 

出 版 物：《中华检验医学杂志》 (Chinese Journal of Laboratory Medicine)

年 卷 期：2012年第35卷第5期

页      面：423-430页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主　　题：流式细胞术 急性淋巴细胞白血病 肿瘤,残余 

摘      要：目的建立八色流式细胞术（8c—FCM）检测急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）微小残留病（MRD）的方法，并进行初步验证。方法采用CD19／侧向角散色光（SSC）、CD45／10和CD34（或cTdT）联合设门，两管八色抗体组合检测B—ALL的MRD。将B—ALL细胞株Nalm－6细胞掺入正常人骨髓细胞中，使Nalm--6细胞占有核细胞比例为10．00％、1．00％、0．10％、0．01％和0．005％，采用已建立的8c—FCM，进行回收试验和重复性试验，评价检测方法的准确度和精密度。检测抗体标记Nalm-6后保存不同时间的荧光强度变化，评价各荧光抗体的稳定性。检测并分析39份骨髓细胞免疫表型，包括对照者9例，初发或复发B-ALL患者9例，B—ALL化疗或骨髓移植（BMT）后缓解期病例21例，评价8c—FCM方法检测正常骨髓B淋巴系细胞群和B—ALL细胞的免疫表型结果，以及对B—ALL的MRD检测结果，并探讨其与现用四色流式细胞术（***）的可比性。结果建立了以CD19、CIM5、CD10为主的两管八色抗体组合检测MRD的方法；当掺人的细胞株占有核细胞比例≥0．10％时，变异系数（CV）〈2．5％，平均回收率为95．81％；当获取10。个细胞，Nalm-6细胞比例10．00％-0．01％时，检测到的Nalm-6细胞占骨髓有核细胞比例与实测值呈线性相关（r=0．99，P〈0．05），该法检测骨髓中Nalm-6细胞的灵敏度达到0．01％。Nalm-6细胞株标记抗体后随时间延长略有降低，但24h内平均荧光强度减低〈10％。应用该方法检测骨髓中CD19阳性的B淋巴系细胞，对照组呈现4个连续发育阶段，可分为4期：I期CD45low／CD10stro／CD20-／CD38stro／CD34＋或eTdT＋，Ⅱ期CD45-／CD10＋／CD20-／CD38stro／CD34＋或cTdT＋，Ⅲ期CD45＋／CD10＋／CD20-／CD38stro／CD34-或cTdT-，Ⅳ期CD45stro／CD10-／CD20＋／CD38low／CD34-或cTdT-。初发和复发B-ALL患者骨髓中自血病细胞与对照组相比，均存在抗原表达异常；8e—FCM检测B—ALL缓解组，有5例存在MRD，主要抗原表达与4c—FCM检测结果一致，5例MRD细胞的范围为0．02％-5．42％。结论本研究所建立的两管8c—FCM新方法检测骨髓中自血病细胞的重复性好、准确度高，可鉴别骨髓正常B淋巴系细胞群、B—ALL治疗缓解后骨髓造血重建的B系前体细胞与MRD细胞群；和4c-FCM比较，两管8c—FCM新方法的标本用量少，检测速度快，能够有效诊断B—ALL的MRD。