DNMT1调控LSM4在Hcy诱导小鼠肝细胞凋亡中的作用及其研究

作     者：夏童童 马芳 刘虹麟 张正皓 丁寒霜 郝银菊 张慧萍 吴凯 焦运 姜怡邓 李桂忠 XIA Tongtong;MA Fang;LIU Honglin;ZHANG Zhenghao;DING Hanshuang;HAO Yinju;ZHANG Huiping;WU Kai;JIAO Yun;JIANG Yideng;LI Guizhong

作者机构：国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室银川750004 宁夏医科大学基础医学院银川750004 宁夏医科大学检验学院银川750004 宁夏医科大学总医院银川750004 湖南省妇幼保健院医学遗传科长沙410008 宁夏医科大学总医院感染科银川750004 

出 版 物：《中国比较医学杂志》 (Chinese Journal of Comparative Medicine)

年 卷 期：2024年第34卷第11期

页      面：34-42页

学科分类：10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(82370293,U21A20343,82060110) 宁夏回族自治区重点研发计划重点项目(2023BEG02074,2022BFH02013,2022BEG02054,2021BEG02028,2020BEG03005) 宁夏医科大学校级科研项目重点项目(XZ2022005) 

主　　题：内分泌与代谢病 LSM4 同型半胱氨酸 凋亡 DNA甲基转移酶1 

摘      要：目的探讨DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)调控LSM4蛋白(Sm-like protein-4,LSM4)在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导小鼠肝细胞凋亡中的作用及机制研究。方法将ApoE-/-小鼠(12只)均分为2组,给予普通饲料喂养设为饮食对照组(ND组,n=6),给予高蛋氨酸饲料喂养设为高蛋氨酸组(HMD组,n=6);NCTC1469小鼠正常肝细胞分为正常对照组(Control组,0μmol/L Hcy)、Hcy干预组(Hcy组,100μmol/L Hcy)、转染干扰片段对照组(si-NC组,0μmol/L Hcy)、转染LSM4干扰片段组(si-LSM4组,0μmol/L Hcy)、转染DNMT1干扰片段组(si-DNMT1组,0μmol/L Hcy)、Hcy干预下对照干扰组(Hcy+si-NC组,100μmol/L Hcy)、Hcy干预下LSM4干扰组(Hcy+si-LSM4组,100μmol/L Hcy)和Hcy干预下DNMT1干扰组(Hcy+si-DNMT1组,100μmol/L Hcy);NCBI数据库分析LSM4在多种组织中表达;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测小鼠组织(HMD组和ND组)和肝细胞(Control组和Hcy组)LSM4蛋白表达差异;Western blot检测凋亡指标Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax)和B淋巴细胞瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达变化;流式细胞术检测Control组、Hcy组、Hcy+si-NC组和Hcy+si-LSM4组细胞凋亡率变化;MethPrimer在线软件分析LSM4启动子区CpG岛;qRT-PCR和Western blot检测Hcy+si-DNMT1组中LSM4蛋白表达。结果与ND组、Control组相比,HMD组、Hcy组LSM4蛋白表达显著增高(P0.05);与Control组比较,Hcy组中Bax蛋白表达显著上调(P0.05),而Bcl-2表达明显降低(P0.05);与Hcy+si-NC组比较,Hcy+si-LSM4组中Bax蛋白表达量显著减少(P0.05),Bcl-2蛋白表达量明显增多(P0.05);与Control组相比,Hcy组细胞凋亡率显著升高(P0.05);相较Hcy+si-NC组,Hcy+si-LSM4组细胞凋亡率下降(P0.05);MethPrimer在线软件分析显示LSM4启动子区GC含量丰富且存在1个CpG岛;与Hcy+si-NC组相比,Hcy+si-DNMT1组LSM4蛋白表达增高(P0.05)。结论DNMT1通过调控LSM4低甲基化使其表达升高,从而促进Hcy诱导的小鼠肝细胞凋亡。