猪流行性腹泻病毒非结构蛋白Nsp15互作宿主蛋白的筛选及鉴定

作     者：孙金磊 于瑞明 张莉萍 张中旺 王永录 潘丽 张全伟 刘新生 SUN Jinlei;YU Ruiming;ZHANG Liping;ZHANG Zhongwang;WANG Yonglu;PAN Li;ZHANG Quanwei;LIU Xinsheng

作者机构：甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2024年第40卷第12期

页      面：4533-4545页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家生猪技术创新中心(NCTIP-XD/C 03) 所级基本科研业务费项目(1610312021011) 

主　　题：猪流行性腹泻 非结构蛋白 蛋白互作 病毒复制 

摘      要：为了筛选和鉴定与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)非结构蛋白15(non-structural protein 15,Nsp15)互作的关键宿主蛋白,通过IP/pull-down beads结合质谱技术筛选、鉴定与PEDV非结构蛋白Nsp15互作的宿主蛋白,并利用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)、激光共聚焦验证其互作关系,最后应用Western blotting和实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)初步明确宿主蛋白SLC25a3与PEDV之间的作用关系。本研究成功构建了Nsp15重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-Flag-Nsp15,并筛选出与PEDVNsp15互作的宿主蛋白SLC25a3。免疫共沉淀及激光共聚焦结果显示PEDVNsp15与宿主蛋白SLC25a3存在互作关系。宿主蛋白SLC25a3能够显著抑制PEDV复制且呈现剂量依赖性。本研究为进一步探究SLC25a3在抗PEDV免疫应答中的作用及机制提供了参考。