健脾益气方干预PTPN1对肝癌细胞增殖侵袭的影响

作     者：孙姗姗 洪静 宋树蕃 孙宗喜 王超 卓少元 SUN Shanshan;HONG Jing;SONG Shufan;SUN Zongxi;WANG Chao;ZHUO Shaoyuan

作者机构：广西中医药大学基础医学院南宁530200 广西中医药大学广西高发传染病中西医结合转化医学重点实验室南宁530200 广西国际壮医医院南宁530200 

出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)

年 卷 期：2025年第31卷第3期

页      面：80-88页

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 100504[医学-方剂学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 1005[医学-中医学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：广西自然科学基金面上项目(2024GXNSFAA010307) 国家自然科学基金地区科学基金项目(81860824,81660775) 广西中医药大学“桂派杏林拔尖人才”项目(2022C004) 

主　　题：健脾益气方 蛋白酪氨酸磷酸酶N1 CRISPR/Cas9 肝癌细胞 增殖侵袭 

摘      要：目的:基于网络药理学方法探讨健脾益气方治疗肝细胞癌(HCC)的核心靶点,并结合生物信息学分析和CRISPR/Cas9技术,研究该方干预潜在核心靶点蛋白酪氨酸磷酸酶N1(PTPN1)对肝癌细胞增殖侵袭的影响。方法:采用中药系统药理数据分析平台(TCMSP)、SwissTargetPrediction、GeneCards、NCBI和CTD等数据库获得健脾益气方治疗HCC的潜在作用靶点,并筛选出与PTPN1作用的健脾益气方有效成分,使用Autodock 4.0评估其对接水平。采用UALCAN、HPA和LinkedOmics等数据库分析PTPN1在肝癌组织中的表达情况及与HCC患者总体生存期(OS)的关系。采用CRISPR/Cas9技术敲减HepG2细胞及SK-hep-1细胞的PTPN1基因,并通过测序、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)确认敲减效果。将HepG2细胞分为对照组、健脾益气方低、中、高剂量组(5.25、10.5、21 g·kg^(-1))和PTPN1敲减组,采用Real-time PCR和Western blot检测健脾益气方干预前后肝癌细胞PTPN1表达水平,并采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)、Transwell和Annexin V-FITC/PI法分别检测PTPN1基因敲减及健脾益气方干预对肝癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响。结果:健脾益气方靶向PTPN1的有效成分最多,其中分子对接结合能-5.0 kcal·mol^(-1)的活性成分有31个。肝癌组织PTPN1 mRNA和蛋白水平均显著高于正常组织(P0.01)。与正常组织比较,肝癌组织PTPN1 mRNA在病理分期Ⅰ~Ⅲ期及病理分级G_(1)-G_(3)级中表达水平均显著升高(P0.01),Ⅳ期和G_(4)级表达水平差异无统计学意义;与TP53未突变肝癌组织相比,TP53突变肝癌组织PTPN1 mRNA表达水平显著升高(P0.01);PTPN1 mRNA高表达的肝癌患者OS显著降低(P0.01)。HepG2细胞PTPN1敲减及健脾益气方含药血清干预后,细胞的增殖侵袭能力均出现显著下降(P0.01)、凋亡能力显著升高(P0.01)。结论:PTPN1可能是健脾益气方治疗HCC的核心靶点之一,其在肝癌组织和肝癌细胞中高表达,并与患者临床预后差相关。PTPN1在TP53突变患者肝癌组织表达水平明显升高,但TP53突变或缺失不会影响其在肝癌细胞中的表达。健脾益气方可能通过下调PTPN1表达显著抑制肝癌细胞增殖侵袭能力、诱导细胞凋亡。