绵羊肺腺瘤病毒和梅迪-维斯纳病毒双重实时荧光RPA检测方法的建立

作     者：李慧萍 刘然 张良 刘淑英 LI Huiping;LIU Ran;ZHANG Liang;LIU Shuying

作者机构：内蒙古农业大学兽医学院 农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室 内蒙古自治区基础兽医学重点实验室 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2025年第55卷第5期

页      面：695-704页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(32072819,32360863) 内蒙古科技重大专项(2021ZD0010) 内蒙古草原英才创新团队项目(20151031) 牛羊疫病防控与发育工程创新团队项目(BR22-13-08) 兽医基础与牛羊疫病防控技术研发创新团队项目(NMGIRT2412) 内蒙古自治区教育厅一流学科科研专项(YLXKZX-NND-012) 

主　　题：绵羊肺腺瘤病毒 梅迪-维斯纳病毒 重组酶聚合酶恒温扩增技术 快速检测 

摘      要：为建立同时检测绵羊肺腺瘤病毒（JSRV）和梅迪-维斯纳病毒（MVV）的实时荧光RPA检测方法，本试验基于JSRV env基因和MVV LTR序列的保守区，设计、筛选特异性引物和探针，优化反应体系和反应条件；对该检测方法进行特异性、灵敏性、重复性评估；利用建立的方法对实验室保存的已确诊为JSRV和MVV混合感染的病肺组织进行检测，并与双重PCR方法平行对比，计算吻合率。结果显示，该方法可在42℃、20 min内完成目标片段的扩增，对于混合感染病肺组织cDNA,JSRV和MVV的最低检测限分别为1ng/μL和10 pg/μL，该方法检测小反刍兽疫病毒（PPRV）、羊败血性链球菌（OSS）、牛肠道病毒（BEV）、传染性鼻气管炎病毒（IBRV）、牛副流感病毒3型（BPIV3）、肺炎支原体（MO）等继发反刍动物呼吸道症状的病原时呈阴性；分别以浓度为10 ng/μL和100 ng/μL的模板进行重复性试验，组内变异系数为3.6%～9.3%；实验室保存的JSRV和MVV混合感染病肺组织的检测结果与双重PCR方法的吻合率为100%。本研究成功建立了JSRV和MVV双重实时荧光RPA检测方法，该方法操作简单、反应快速，结果确实可靠，可用于JSRV和MVV的鉴别诊断及混合感染的快速临床检测。