新疆野核桃SRAP-PCR反应体系的优化及引物筛选

作     者：张捷 李勤霞 张萍 余甜 

作者机构：新疆农业大学林学与园艺学院/新疆教育厅干旱区林业生态与产业技术重点实验室新疆乌鲁木齐830052 

出 版 物：《江苏农业科学》 (Jiangsu Agricultural Sciences)

年 卷 期：2016年第44卷第3期

页      面：64-66页

学科分类：09[农学] 0902[农学-园艺学] 090201[农学-果树学] 

基　　金：国家自然科学基金(编号:31260187) 新疆维吾尔自治区森林培育重点学科 

主　　题：SRAP分子标记 新疆野核桃 正交试验 引物筛选 体系优化 

摘      要：利用正交设计对新疆野核桃序列相关扩增多态性PCR(SRAP-PCR)反应体系中的5个因素(模板DNA、Mg2+、引物、d NTPs、Taq DNA聚合酶浓度)在5水平上进行优化,对比不同浓度模板DNA对扩增结果的影响,建立了新疆野核桃SRAP最佳反应体系。结果表明,优化的新疆野核桃SRAP-PCR最佳反应体系为:20μL的反应体系中,2.5μg/m L模板DNA、0.4μmol/L引物、2 mmol/L Mg^(2+)、0.2 mmol/L d NTPs、25 U/mL Taq酶U;最佳PCR扩增程序的退火温度为54℃。各因素扩增结果表明,Mg^(2+)浓度对扩增反应结果影响最大,d NTPs浓度影响最小。运用该体系对新疆野核桃样本进行了验证,表明该体系扩增稳定可靠。用该体系对100个SRAP引物组合进行筛选,筛选出15个扩增条带清晰且多态性丰富的引物组合,为新疆野核桃种质资源研究奠定了基础。