m5C阅读器YBX1通过调节铁死亡抑制因子MS4A15的稳定性促进结直肠癌生长

作     者：夏术森 朱彦斌 刘礼鑫 蒙长远 彭洪 

作者机构：成都医学院第一附属医院胃肠外科 川北医学院附属医院血管外科 川北医学院附属医院胃肠外科二 川北医学院第二临床医学院肛肠外科 

出 版 物：《重庆医科大学学报》 (Journal of Chongqing Medical University)

年 卷 期：2025年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：四川省科技厅面上资助项目(编号:2024NSFSC0737) 四川省中医药管理局课题资助项目(编号:2024MS590) 四川省临床重点专科经费资助项目(编号:ZX-2428-1) 成都医学院第一附属医院科研启动基金(编号:CYFY-GQ71) 2024年医学影像四川省重点实验室开放课题(编号:MIKL202407) 2024年医学影像四川省重点实验室开放课题(编号:MIKL202407) 

主　　题：结直肠癌 5-甲基胞嘧啶 Y-框结合蛋白1 铁死亡 人跨膜结构域4亚家族成员15 

摘      要：目的：探讨5-甲基胞嘧啶（5-methylcytosine,m5C）阅读器Y-框结合蛋白1 (Y-box binding protein1,YBX1)通过调节铁死亡抑制因子人跨膜结构域4亚家族成员15(Membrane-spanning 4-domains subfamily A 15,MS4A15)的稳定性参与结直肠癌发生发展的分子机制。方法：通过生物信息学数据库分析YBX1 mRNA和蛋白在结肠癌中的表达。RT-qPCR法检测结直肠癌细胞中YBX1的表达水平。LC-MS法检测结直肠癌细胞和正常结直肠粘膜细胞中m5C修饰水平。CCK8法检测YBX1对结直肠癌细胞增殖的影响，Transwell法检测对结直肠癌细胞迁移能力的影响，流式细胞仪检测对结直肠癌细胞凋亡的影响。通过生物信息学方法分析可与YBX1相互作用的铁死亡抑制因子MS4A15和潜在m5C修饰位点。通过GEPIA2分析YBX1表达与MS4A15的相关性。抑制YBX1表达并分析MS4A15 mRNA的表达水平及MS4A15的m5C修饰水平。通过catRAPID数据库寻找YBX1蛋白和MS4A15 mRNA的结合位点。抑制YBX1表达并用放线菌素D(actinomycinD)处理结直肠癌细胞，RT-qPCR法检测MS4A15 mRNA的稳定性。抑制MS4A15表达并检测细胞增殖活性，细胞迁移能力和细胞凋亡率，抑制MS4A15表达，检测铁死亡关键指标MDA、ROS和Fe2+的表达水平。结果：YBX1 mRNA和蛋白在结直肠癌中高表达并且YBX1在结直肠癌细胞中高表达。结直肠癌细胞的m5C修饰水平明显高于正常结直肠粘膜细胞。YBX1可促进结直肠癌细胞增殖，迁移及抑制细胞凋亡。生物信息学分析证实YBX1与铁死亡抑制因子MS4A15表达水平呈正相关，并且MS4A15上存在多个潜在m5C修饰位点。抑制YBX1表达可降低MS4A15 mRNA表达水平及MS4A15基因的m5C修饰水平，并可降低MS4A15 mRNA的稳定性。抑制MS4A15表达后细胞增殖活性和细胞迁移能力明显降低，细胞凋亡率增高，MDA、ROS和Fe2+含量均明显增高。结论：上述结果表明YBX1通过m5C修饰稳定MS4A15促进结直肠癌的发生和发展，为结直肠癌患者提供有前景的靶向治疗策略。