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内蒙古自治区呼和浩特市赛罕区大学西街235号 邮编: 010021
作者机构:福建中医药大学附属第二人民医院脾胃病科
出 版 物:《吉林大学学报(医学版)》 (Journal of Jilin University(Medicine Edition))
年 卷 期:2024年
学科分类:1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学]
基 金:国家自然科学基金项目(82174365) 福建省科技厅自然科学基金项目(2023J01821) 中国中医科学院科技创新工程学部委员学术传承与传播专项课题(CI2022E017XB)
主 题:慢性萎缩性胃炎 复方胃炎合剂 网络药理学 分子对接分析 实验验证
摘 要:目的:探讨复方胃炎合剂(CGM)治疗慢性萎缩性胃炎(CAG)的活性成分和作用靶点,联合分子对接分析和细胞实验验证其潜在机制。方法:从中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和Swiss Target Prediction数据库筛选CGM药物的活性成分,获取各药物成分相应的靶点。采用GeneCards和人类在线孟德尔遗传(OMIM)数据库筛选CAG对应的靶点。于Venny2.1.0网络平台中获取CGM与CAG的共同靶点,采用STRING在线平台对“药物-疾病的共同靶点构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,并筛选核心靶点。采用Cytoscape3.9.1软件构建药物成分-疾病-靶点网络,并筛选药物核心成分。采用基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析CGM与CAG的共同靶点,AutoDock分析软件对预测的药物主要成分与核心靶点进行分子对接分析。采用脂多糖(LPS)诱导胃黏膜上皮细胞GES-1,构建CAG细胞模型。将GES-1细胞分为空白组(10%血清完全培养基)、模型组(10 mg·L-1LPS)、不同浓度CGM组(50、100、200、400、800和1 600 g·L-1CGM+10 mg·L-1LPS),共培育12、24和48 h,采用CCK-8法检测各组GES-1细胞增殖活性。将GES-1细胞分为空白组(10%血清完全培养基)、模型组(10 mg·L-1LPS)和CGM组(1 600 g·L-1CGM+10 mg·L-1LPS),实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组GES-1细胞中白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1 (AKT1)、IL-1β和表皮生长因子受体(EGFR) mRNA表达水平。结果:筛选获得CGM成分198个,与CAG共有的靶点128个。CGM治疗CAG的药物成分主要为槲皮素、山奈酚和木犀草素,主要作用于IL-6、TNF、AKT1、IL-1β和EGFR等靶点。GO功能富集分析显示,排名前15位靶点主要集中于细胞凋亡、炎症反应、细胞增殖等生物学过程(BP),主要包括细胞质、细胞表面、大分子复合体等细胞组分(CC),主要发挥蛋白质、酶、泛素蛋白连接酶等分子功能(MF)。KEGG信号通路富集共获得158条通路,主要涉及癌症相关的通路、TNF信号通路、病毒感染、程度性细胞死亡受体-配体1(PD-L1)/程度性细胞死亡受体1 (PD-1)通路、细胞凋亡、NOD样受体信号通路、Toll样受体信号通路、EGFR和IL-17信号通路等。关键靶点IL-6、TNF、IL-1β、AKT1和EGFR与药物核心成分槲皮素、山奈酚和木犀草素的结合能均-5 kcal·mol-1。CCK-8法检测,与空白组比较,细胞培养24和48 h后,模型组细胞增殖活性均明显降低(P0.01),且48 h后细胞增殖活性抑制更明显,因此选择LPS诱导48 h为造模时间;与模型组比较,800和1 600 g·L-1GCM组细胞增殖活性均明显升高(P0.01),1 600 g·L-1GCM组细胞增殖活性促进作用更明显,故选该药物干预浓度进行后续实验。RT-qPCR法检测,与空白组比较,模型组细胞中IL-6、TNF、IL-1β、AKT1和EGFR mRNA表达水平均明显升高(P0.01);与模型组比较,CGM组细胞中IL-6、IL-1β、AKT1和EGFR mRNA表达水平均明显降低(P0.01)。结论:GCM可以通过槲皮素、山奈酚和木犀草素等多个药物成分,作用于IL-6、TNF、AKT1、IL-1β和EGFR等多个靶点蛋白,并涉及多种与“炎-癌有关的通路,起到防治CAG的作用。