柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶真核表达质粒的构建与鉴定

作     者：王艳歌 董辉 韩红玉 赵其平 朱顺海 李榴佳 吴有陵 黄兵 WANG Yan-ge;DONG Hui;HAN Hong-yu;ZHAO Qi-ping;ZHU Shun-hai;LI Liu-jia;WU You-ling;HUANG Bing

作者机构：中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室上海200241 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2014年第22卷第2期

页      面：65-71页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金(31272557) 

主　　题：柔嫩艾美耳球虫 乳酸脱氢酶 IFN-γ基因 293T细胞 真核表达 

摘      要：为构建柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶(Eimeria tenella Lactate dehydrogenase,EtLDH)的真核表达质粒,分别以柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子和鸡脾脏cDNA为模板,PCR扩增出EtLDH和鸡IFN-γ基因,PCR产物经酶切回收目的片段后与相应酶切的真核表达载体pCAGGS连接,构建了真核表达质粒pCAGGS-EtLDH和pCAGGS-EtLDH-IFN-γ。所构建的真核表达质粒经酶切和测序鉴定为正确后转染293T细胞进行表达,分别用Western blot和间接免疫荧光鉴定EtLDH基因的表达情况。Western blot结果可见大小约为37 kDa的目的蛋白条带,间接免疫荧光可以检测到特异性红色荧光。结果表明成功构建了EtLDH的真核重组表达质粒pCAGGS-EtLDH和pCAGGS-EtLDH-IFN-γ,并能在真核细胞中表达,为深入研究EtLDH的生物学功能和球虫DNA疫苗的研制奠定了基础。